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G-Biosciences ANB-NOS (N-5-Azido-2-nitrobenzoyloxysuccinimide)

兩步交聯反應原理

第一步（避光共價偶聯，pH 6.5–8.5）

NHS 酯溫和與蛋白、多肽、抗體上伯氨基（Lys 側鏈、N 端氨基） 形成穩定酰胺鍵，完成探針預標記；全程避光，避免疊氮提前分解。

第二步（紫外光誘導非特異性交聯）

320–350 nm 紫外照射下，硝基疊氮基團釋放氮氣生成高活性氮賓自由基，快速與鄰近任意氨基酸、核酸、脂質發生共價交聯，捕捉瞬時蛋白互作復合物。

核心實驗應用場景

蛋白 - 蛋白相互作用光交聯

膜蛋白、信號通路復合物、分泌蛋白瞬時互作捕獲（經典用于信號識別顆粒 SRP 與新生多肽交聯）

胞內原位標記

脂溶性可穿透細胞膜，活細胞內靶向標記胞內蛋白、受體配體復合物

蛋白 - 核酸交聯

RNA/DNA 結合蛋白光捕獲，降低紫外對核酸的降解損傷

固相載體偶聯、納米材料修飾

氨基修飾二氧化硅、生物材料表面共價接枝生物分子

抗體藥物偶聯 ADC、免疫探針構建

光控定點偶聯，減少蛋白變性

細胞膜結構、細胞表面受體互作研究

G-Biosciences ANB-NOS (N-5-Azido-2-nitrobenzoyloxysuccinimide)

儲存、操作與安全規范

1. 儲存條件

• 長期保存：-20 ℃，避光、干燥密封，防潮吸潮（吸潮會直接失活）

• 短期使用：2–8 ℃避光，開封后一次性配液，避免反復凍融

2. 操作要點

1. 全程避光操作，配液、孵育階段遮光；紫外交聯步驟單獨避光處理

2. 先溶于無水 DMSO/DMF 配母液，再稀釋至水相緩沖液；水溶液中 NHS 酯半衰期短，現配現用

3. 紫外交聯推薦 302 nm 紫外燈，照射 5–10 min 即可完成交聯

3. 安全提示

• 僅科研體外實驗使用，禁止臨床、體內給藥

• 疊氮類試劑避免強酸、重金屬，防止生成易爆疊氮化物；操作佩戴手套護目鏡

上海寶葉生物科技有限公司

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