HUVEC(HUV-EC-C)（人臍靜脈血管內皮細胞）

一、細胞收到后操作流程

1.收到細胞拿回實驗室后，先打開外包裝，用 75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，放到顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，細胞會有不同程度影響，先不要打開培養瓶蓋，放到培養箱靜

置 4 小時左右，以便穩定細胞狀態。

2.靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(所拍照片作為后期售后依據)。建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。

3.貼壁細胞：若細胞生長密度超過 80%時，根據情況傳代，若細胞未超過 80%匯合度時，可將瓶裝的專用培養液移入廢液缸中，原瓶（T25 瓶）保留 6-8ml 專用培養液繼續培養，直至細胞密度超過 80%以后再進行傳代。

4.懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體轉移至離心管，1000RPM 離心 5 分鐘，棄去上清液，管底細胞沉淀加入 10ml 專用培養基吹打、重懸。放入新的細胞培養瓶/皿中培養過夜，根據細胞密度及生長情況分瓶傳代。

二、細胞常規培養步驟（請嚴格遵守無菌操作）

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入 6cm 皿中，加入約 6ml 培養基，培養過夜），第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養瓶中上清液，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培養箱中消化 1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕輕敲幾下培養瓶后加 6ml 專用培養基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落、吹散。

3. 吹打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 到 1：4 的比例分到新的含 6ml 培養基的新皿中或者瓶中。

2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻，將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 6ml 培養基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按 1：2到 1：3 的比例分到新的含 6ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM 條件下離心 5 分鐘，去除上清，

按凍存數量加入血清及 DMSO，凍存比例為 90%FBS+10%DMSO。

注意事項：

1. 收到細胞后請盡快更換為含10% FBS的新鮮培養基，不建議使用原瓶中運輸用培養基。

2. 如簽收時出現培養瓶壁破裂，漏液等情況請及時拍照并聯系實驗室。

3. 細胞任何售后問題，均需拍照存檔并及時聯系客服。

細胞用途：僅供科研使用，不能用于臨床診斷使用，細胞培養需要耐心與細心，希望您能獲得一個滿意的結果。