產品描述

種屬: 人源（Homo sapiens）

組織來源: 胰腺（pancreas）

疾病: 癌癥（Carcinoma）

年齡: 未知（Unknown）

性別: 未知（Unknown）

細胞類型: 成纖維細胞（Fibroblast）

生長特性: 貼壁生長（Adherent）

拆包 & 存儲

1. 請立即檢查包裝袋是否有破損或漏液

2. 請立即將細胞培養瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進行培養傳代

注意：如為凍存管，請收到后立即解凍培養。若來不及解凍，請儲存于液氮中（存儲于負80度，會降低細胞存活率）

培養瓶中細胞操作步驟

對于貼壁培養的細胞，寄送前，我們會將運輸培養基（收到后請使用培養基培養）充滿整個培養瓶，以減少產品運輸過程中貼壁細胞的脫落。

1. 收到細胞產品后，請注意觀察是否有污染。將培養瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。因在運輸過程中存在顛簸，且有些細胞對溫度變化也很敏感，可能存在一些細胞脫落漂浮的情況，這些細胞仍是活細胞，請勿丟棄，可離心富集后傳代使用。

2. 對于貼壁的細胞，在生物安全柜環境中，用真空泵去除培養瓶中的多余培養基，至剩余5-8mL左右，隨后將細胞置于含有5%CO?的37℃恒溫 培養箱中培養，擰松瓶蓋。如果細胞已經長滿培養瓶請立即傳代。

3. 對于懸浮的細胞，在生物安全柜環境中，轉移培養瓶中的細胞至離心管中，離心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培養基吹散細胞，轉移至新的培養瓶中，隨后置于含有5%CO?的37℃恒溫培養箱中培養。

凍存細胞操作步驟

注意：為保存細胞的高存活率，請收到產品后，立即解凍培養。

1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染， 確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。

2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續操作須在生物安全柜中完成。

3.將凍存管中的液體轉移到含有5mL培養基的離心管中， 離心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有凍存液的上清。

4. 用培養基重新懸浮細胞并轉移到新的培養瓶中。為保證細胞復蘇的存活率，請將培養基在37℃水浴預熱后使用。

5. 將細胞置于含有5%CO?的37℃恒溫培養箱中培養。

貼壁細胞傳代培養

1. 吸取并棄掉培養瓶中培養基, 加入PBS清洗一次。

2. 加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37 ℃培養箱中孵育，直至細胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘（此處為12.5 cm2 培養瓶所用體積，可根據實際情況增減用量）。

3. 加入2mL培養基中和，并輕輕吹打將細胞從培養瓶表面吹落，并使細胞分散。

4. 離心200x g/5 min，去除上清后，取適量的培養基將細胞重懸, 取適量懸液置于新的培養瓶中，并加入新鮮細胞培養基至總體積為4mL。

5. 將細胞置于含有5%CO?的37℃恒溫培養箱中培養。

傳代比例：建議 1:2 至 1:3（以培養瓶底面積計算）

培養基換液: 每隔 2 至 3 天。

培養基配制

該細胞系培養所用基本培養基為CAFs專用培養基。

使用范圍

本產品于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。

我們主要的產品有：病理學檢測服務，細胞與蛋白，分子生物學檢測，動物實驗造模，科研細胞及相關周邊配套產品與服務。

細胞產品：包含細胞系、原代細胞、永生化細胞（支持定制），Luc示蹤細胞、IPS細胞、耐藥株、細胞代購服務。

病理服務：包含普通病理（包埋，切片，染色）、分子病理（組化、免疫熒光、TUNEL、原味雜交）、病理圖像（切片掃描、單標多標、共聚焦、三維重建）、超微病理（透射電鏡、掃描電鏡、免疫電鏡服務）。

培養基產品：包含基礎培養基如DMEM、DMEM/F12、1640、MEM、EMEM、F12、F12K、L15、DMEM低碳、1640低碳，無酚紅定制產品等基礎培養基供應。

細胞系專用培養基：涵蓋我庫所有細胞系對應的專用培養基（含血清，因子，雙抗等），價格實惠。

原代細胞專用培養基包括：

DELF原代上皮細胞專用培養基（EpiCM）

DELF原代成纖維細胞專用培養基（FM）

DELF原代內皮細胞專用培養基（ECM）

IPS人誘導多能干細胞專用培養基

DELF原代神經元細胞專用培養基

DELF原代少突膠質細胞專用培養基

DELF原代星形膠質細胞專用培養基

DELF原代肝實質細胞專用培養基

DELF原代星狀細胞專用培養基

DELF原代角質形成細胞專用培養基

DELF原代巨噬細胞專用培養基

DELF原代間充質干細胞專用培養基

DELF原代內皮祖細胞專用培養基

DELF原代神經干細胞專用培養基

DELF原代周細胞專用培養基

DELF原代雪旺細胞專用培養基

DELF原代黑色素細胞專用培養基

DELF原代骨骼肌細胞專用培養基

DELF原代成骨細胞專用培養基

DELF原代軟骨細胞專用培養基

DELF原代腎系膜細胞專用培養基

DELF原代心肌細胞專用培養基

DELF原代前脂肪細胞專用培養基

DELF原代間充質干細胞無血清專用培養基

DELF原代平滑肌細胞專用培養基

DELF原代平滑肌細胞低血清專用培養基

DELF原代腫瘤細胞專用培養基

DELF原代間質細胞專用培養基

DELF原代T淋巴細胞專用培養基

DELF原代卵巢顆粒細胞專用培養基

DELF原代肥大細胞專用培養基

DELF原代破骨細胞專用培養基

DELF原代NK細胞專用培養基

DELF原代內膜細胞專用培養基

DELF原代B淋巴細胞專用培養基

DELF原代精原細胞專用培養基

DELF原代樹突狀（DC）細胞專用培養基

DELF原代肝卵圓細胞專用培養基

DELF原代腎足細胞專用培養基

DELF原代基底細胞專用培養基

DELF原代基質細胞專用培養基

DELF原代CIK細胞專用培養基

DELF原代淋巴細胞專用培養基

DELF原代肌腱細胞專用培養基

DELF原代卵泡膜細胞專用培養基

DELF原代支持細胞專用培養基

DELF原代髓核細胞專用培養基

DELF原代脂肪細胞專用培養基

DELF原代絨毛膜滋養層細胞專用培養基

請注意：

所有500ml專用培養基采用分裝形式發貨，其中細胞因子，雙抗，血清采用干冰發貨，基礎培養基采用冰袋發貨。收到貨后根據業務經理提示的配置方式進行配置，各成分按照存儲溫度分開存儲。

1）細胞凍存復蘇操作

取裝有1 mL 細胞懸液的凍存管，置于 37 ℃水浴中快速振蕩至完全解凍；將細胞懸液移入裝有 4~6 mL 完全培養基的離心管，充分混勻。 1000 RPM 離心 3~5 min，棄除上清，加入新鮮完全培養基重懸細胞。把細胞懸液接種至培養瓶（培養皿），補加 6~8 mL 完全培養基，于 37 ℃恒溫培養箱靜置培養過夜。次日在顯微鏡下觀察細胞狀態與匯合密度。

2）細胞傳代培養

當細胞匯合度達到 80%~90% 時即可進行傳代操作。 本細胞貼壁性能弱，屬于半貼壁 + 半懸浮混合生長型細胞，傳代操作步驟如下：

1. 細胞收集 先把培養瓶內懸浮細胞全部轉移至離心管；采用無鈣鎂 PBS 洗滌貼壁細胞 1~2 次。該細胞貼壁不牢固，洗滌過程中貼壁細胞會隨 PBS 脫落，因此洗滌液同樣收集至離心管內。

2. 胰酶消化 向培養瓶內加入 0.25%(w/v) 胰蛋白酶 - 0.53 mM EDTA 消化液（T25 培養瓶加 1~2 mL，T75 培養瓶加 2~3 mL），放入 37 ℃培養箱消化 1~2 min；若細胞較難消化，可適度延長消化時長。顯微鏡下觀察，待絕大多數細胞回縮變圓、開始脫壁后迅速取出培養瓶，輕敲瓶壁，隨即加入 3~4 mL 含 10% 胎牛血清的培養基終止胰酶消化。

3. 離心分瓶接種 將懸浮細胞、PBS 洗滌細胞與胰酶消化收獲的所有細胞合并，1000 rpm 離心 5 min，棄上清。加入 1~2 mL 新鮮培養基充分重懸，按照 1:2 的比例分裝至新 T25 培養瓶，每瓶補加 6~8 mL 新鮮配制的完全培養基，維持細胞活性。后續傳代可依據細胞生長速率，調整分裝比例為 1:2 ~ 1:5。

3）細胞凍存保種

建議在細胞到貨后的前 3 代完成種子細胞凍存，留存保種庫，保障后續實驗供給。 以 T25 培養瓶為例，操作流程如下：

1.參照細胞傳代流程完成細胞消化與收集，使用血球計數板測定活細胞濃度。推薦凍存終密度：(1×106 至1×107) 個活細胞 /mL。

2.1000 rpm 離心 3~5 min，充分棄除上清液；用預先配制好的凍存液重懸細胞，調整濃度至目標密度，分裝至細胞凍存管。在凍存管外壁清晰標注細胞名稱、細胞代數、凍存日期等關鍵信息。

3.將凍存管放入程序降溫盒，置于 - 80 ℃冰箱梯度降溫過夜；次日轉移至液氮罐中長期保存，同步登記凍存位置編號，方便后續調取。

懸浮細胞傳代方法

1.當細胞密度達到8-10×105cell/ml 時，進行傳代處理。

2.在生物安全柜無菌環境下打開培養瓶，將瓶內全部細胞懸液移入離心管。

3.1000 rpm 離心 5 min，離心結束后棄除上清培養液。

4.準備 2 支全新 T-25 培養瓶。向細胞沉淀中加入完全培養基充分重懸，把細胞濃度調整至 2-4×105cell/ml，均分接種至兩個培養瓶內，每瓶補加培養基至 6～8 mL。

5.水平平放培養瓶，輕輕搖勻細胞懸液，放入 37 ℃、5% CO?恒溫培養箱靜置培養。

僅用于科研，不用于臨床