SYBR Color qPCR Mix

產品描述

Taq Visual SYBR qPCR Premix (Universal) 是SYBR Green I嵌合染料法專用qPCR 試劑，為2× 預混液，包含除引物和DNA 樣品以外的所有qPCR 組分，可減少操作步驟，縮短加樣時間，降低污染幾率。其核心組分是經抗體修飾的熱啟動Taq DNA 聚合酶，配合精心優化的Buffer 體系以及PCR 反應促進因子，特異性強、擴增效率高，可有效抑制非特異性擴增，對寬廣濃度范圍的模板進行準確定量，獲得穩定可靠的qPCR 結果。本品已含有通用校正染料，與絕大多數qPCR 設備兼容，不需要額外添加染料來校正儀器。

本品可利用不同染料混合后產生的變色效應，追蹤移液過程，從而顯著減少移液錯誤。Taq Visual SYBR qPCR Premix 中包含藍色染料，10× Dilution Buffer 中包含黃色染料。當Taq Visual SYBR qPCR Premix（藍色）中加入了用Dilution Buffer 稀釋的模板（黃色）后會產生藍色→ 綠色的變色效應，從而可以根據液體顏色準確判斷是否已加入模板。

訂購信息

產品組分

運輸與保存

藍冰運輸。短期4℃避光保存，有效期1個月；長期-20℃避光保存，有效期24個月。【注】：避免反復凍融。

使用方法

1.     模板稀釋

使用過程中，如需要進行移液追蹤，則根據下表選擇合適的方式提前添加Dilution Buffer 至模板中，然后進行qPCR 檢測；如不需要進行移液追蹤，則不使用Dilution Buffer 即可。

【注】：如果Dilution Buffer 使用不當，有可能影響qPCR 結果。

2.     建議的qPCR 反應體系

（a）通常推薦的引物終濃度為0.2 μM，可在0.1~1 μM 范圍內調整；

（b）如使用Dilution Buffer 進行加樣追蹤，模板體積請勿超出2~5 μl/20 μl reaction。如果模板用量低于2 μl/20 μl reaction，會造成顯色偏淡，影響追蹤效果；如果模板用量高于5 μl/20 μl reaction，Dilution Buffer 中的成分可能會干擾qPCR 反應。不同種類DNA 模板中含有的靶基因拷貝數目不同，必要時可進行梯度稀釋，以確定最佳的DNA 模板添加量。【注】：當模板類型為未稀釋cDNA 原液時，不論其是否包含1× Dilution Buffer，使用體積均不應超過qPCR 反應總體積的1/10，即2 μl/20 μl reaction。

3.     qPCR 反應程序（可根據機型適當調整）

（1）兩步法流程：

（a）根據引物的Tm 值進行退火& 延伸（退火）溫度的設定；若擴增片段在200bp 以內，退火& 延伸（延伸）時間可以設置為15 s；此外，退火& 延伸（延伸）時間的設置還需根據您使用的qPCR 儀所需要的最短數據采集時間自行調整。

4.     實驗優化

① 引物濃度調整

當引物終濃度在0.1~1.0 μM 范圍之間變化時，引物濃度越低，擴增特異性越高，但擴增效率會有所下降。

② 擴增程序優化

需提高擴增特異性，可使用兩步法程序或提高退火溫度；需提高擴增效率，可使用三步法程序或延長延伸時間。

5.     引物設計原則

① 擴增產物長度建議控制在80~200 bp；

② 引物長度為18~25 bp；

③ 兩條Tm 值相差不超過1℃，Tm 值控制在58~62℃；

④ 引物的GC 含量控制在40%~60%；

⑤ 引物A、G、C、T 整體分布盡量要均勻，避開T/C 或者A/G 的連續結構（特別是3' 端），3' 端最后一個堿基最好為G 或者C；

⑥ 避開引物內部或者兩條引物之間的互補序列；

⑦ 使用NCBI BLAST 功能檢索確認引物的特異性。

注意事項

1.     本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。

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