利用血管緊張素I提取比較傳統的SPE柱與磁性萃取劑的性能

檢測樣品：血管緊張素I

檢測項目：固相萃取

方案概述：血管緊張素!（Ang I）是較為常見的臨檢標志物之一，通過對血管緊張素提取效果的漢試，能夠有效地評價各種樣品前處理手段的臨床適用性和技術性能。本文通過對比市售的某著名進口品牌HLB 96位SPE多孔板和HLB磁性SPE萃取劑提取Ang I試驗的各項方法學指標，直觀地比較了兩者的性能表現。也為臨床SPE樣品前處理技術的發展前景提供了非常有價值的參考。

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更新時間2022年05月11日

上傳企業普敦科技

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利用血管緊張素I的提取比較傳統SPE柱與磁性萃取劑的性能

關鍵詞

血管緊張素I，液相色譜質譜，固相萃取，Angiotensin I，Ang I，Renin，LC-MS/MS，SPE

前言

血管緊張素I（Ang I）是較為常見的臨檢標志物之一，通過對血管緊張素I提取效果的測試，能夠有效地評價各種樣品前處理手段的臨床適用性和技術性能。

本文通過對比市售的某有名的進口品牌HLB 96位SPE多孔板和HLB磁性SPE萃取劑提取Ang I試驗的各項方法學指標，直觀地比較了兩者的性能表現。也為臨床SPE樣品前處理技術的發展前景提供了非常有價值的參考。

實驗設計

如下表所示，使用1% BSA制備四個濃度水平的Ang I系列標準溶液，輔以穩定同位素標記的Ang I內標。

Ang I	濃度（ng）	內標濃度（ng）
LOQ	0.5	10
低水平（L）	7.5	10
中水平（M）	30	10
高水平（H）	80	10

設定如下條件的SPE，應用于某著名進口品牌HLB 96位SPE多孔板。使用適配的正壓96孔SPE操作裝置運行樣品。

名稱	操作
活化	使用500 μL甲醇活化SPE板兩次
平衡	使用500 μL5%甲酸水溶液活化SPE板兩次
上樣	取500 μL LOQ、低（L）、中（M）、高（H）上樣
淋洗1	使用500 μL5%甲酸水溶液淋洗SPE板兩次
淋洗2	使用500 μL20%甲醇水溶液淋洗SPE板兩次
洗脫	每孔各加入250 μL甲醇，收集洗脫液于96孔板中

與此對應的，為AUTO M32全自動萃取儀設定如下的程序運行樣品，每個樣品使用2mg HLB磁性萃取劑。

指令	溶液	孔位	溶劑量（μL）
活化	甲醇	1	500
平衡	5%甲酸水溶液	2	500
上樣	樣品溶液	3	500
淋洗1	5%甲酸水溶液	4	500
淋洗2	20%甲醇水溶液	5	500
洗脫	甲醇	6	250
排廢	/	2	600

數據和比較

將實驗設計中所述的四個標準樣本，每個樣品重復三次提取，比較兩種前處理方法提取后，在LC-MS/MS上測得的相對標準偏差，結果如下圖所示。其中，左側藍色柱為使用某著名進口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后的測定結果，右側橙色柱為使用磁性萃取劑提取后的測定結果。


	圖b，低水平（L）重現性

可以看到，兩種前處理方法無論在外表峰面積、內標峰面積、計算濃度上的相對標準偏差均沒有顯著的差別，但是磁性萃取劑的結果在大多數水平下都略好于傳統的96位SPE多孔板。

在提取率的比較中，我們選擇某著名進口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后測得的峰面積為基準（100%），以磁性萃取劑提取后測得的峰面積與之比較。如下圖所示，左側藍色柱為使用某著名進口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后的測定結果，右側橙色柱為使用磁性萃取劑提取后的測定結果。

最后如下圖展示的LOQ水平兩種方法提取后，在LC-MS/MS所得的MRM色譜圖。圖a為使用傳統的96位SPE多孔板所得色譜圖，圖b為磁性萃取劑所得色譜圖。可以看到，在所有濃度水平下，磁性萃取劑提取測得峰面積均顯著地好于傳統的96位SPE多孔板，且均超過后者50%以上，最高甚至達到了約1.8倍。

結果討論
明顯地，在LOQ水平下，磁性萃取劑提取得到的色譜峰高超過了傳統的96位SPE多孔板提取，這與提取率結果是*一致的。

通過上述數據比較，我們可以得到如下表所述的結果。

	絕對重復性	相對重復性	提取率	LOQ質量	操作模式
某著名進口品牌96位SPE多孔板	較佳	較佳	適中	適中	手動+負壓裝置
磁性萃取劑	較佳	較佳	優50%以上	較佳	少量手動+自動設備