臍帶血是指胎兒出生時(shí)臍帶內(nèi)及胎盤(pán)近胎兒一側(cè)血管內(nèi)的血液。臍帶血單個(gè)核細(xì)胞（Cord Blood Mononuclear Cell，CBMC) 分離自正常人胎盤(pán)臍帶組織，是臍帶血中具有單個(gè)核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等，是機(jī)體防御系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分。

1    原理

單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與其它細(xì)胞不同，在沉降過(guò)程中不同比重的細(xì)胞會(huì)處于不同的分布位置。因此，可利用各種血細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞比重之間的差異將各種血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離開(kāi)來(lái)。

2    方法

1）  取新鮮抗凝臍帶血，按照1：1比例加入RPMI 1640培養(yǎng)基，將血液進(jìn)行稀釋（以降低血液粘稠度），輕柔混勻，備用。

2）  向無(wú)菌離心管內(nèi)加入適量的單個(gè)核細(xì)胞分離液，將稀釋后的臍帶血平鋪到分離液液面上方（分離液：稀釋臍帶血=1：2），保持兩液面界面清晰。

3）  800g，室溫，離心 20min-30min（注：設(shè)置較慢的加速度和減速度，如果有十檔，設(shè)為第三檔）。

4）  離心結(jié)束后，吸棄血漿層，小心吸取CBMC層（即白膜層）并轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。離心結(jié)束后，管內(nèi)液面從上至下依次為稀釋血漿層、CBMC層、分離液層和紅細(xì)胞層（見(jiàn)圖1）。

圖1 稀釋臍帶血離心前后的分層狀態(tài)圖

5）  向離心管中加入10mL 的RPMI 1640培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞，250g，室溫離心 10min ，棄上清。重復(fù)該步驟 1~2 次，即可用于后續(xù)試驗(yàn)。

3    注意事項(xiàng)

1）  血液新鮮程度是影響分離效果的關(guān)鍵因素，請(qǐng)盡量使用采集后24h內(nèi)的血液進(jìn)行CBMC分離。

2）  為保證細(xì)胞的活力，整個(gè)操作過(guò)程請(qǐng)輕柔，避免對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械性的損傷。

3）  為保持細(xì)胞狀態(tài)良好，請(qǐng)盡量縮短整個(gè)試驗(yàn)的周期。

4    臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒

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IPHASE/匯智和源針對(duì)人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分離的特點(diǎn)，開(kāi)發(fā)了人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒。該試劑盒包含單個(gè)核細(xì)胞分離液和洗滌液兩個(gè)組分，各成分對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，不會(huì)影響細(xì)胞的原始狀態(tài)；同時(shí)，該試劑盒操作簡(jiǎn)單便捷，可大大縮短細(xì)胞分離時(shí)間，分離所得細(xì)胞純度高、狀態(tài)好、得率高。

5    相關(guān)產(chǎn)品

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• 人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞CBMC

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