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熒光染料簡介

閱讀:3498      發布時間:2022-3-11
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概述

熒光顯微鏡的基本原理是借助熒光染料對細胞成分進行高度特異性的可視化觀察。這可能是一種與興趣蛋白質遺傳相關的熒光蛋白,如綠色熒光蛋白(GFP)等。如果克隆無法實現,例如在組織學樣本上無法實現,則需要使用另一種技術如免疫熒光染色來對興趣蛋白質進行可視化觀察。為此,人們使用抗體來連接不同的熒光染料并將其直接或間接地結合到適當的靶點上。此外,借助熒光染料,熒光顯微鏡的應用就不再僅局限于蛋白質觀察,還能對核酸、多糖和其他結構進行染色,甚至像鈣離子這樣的非生物物質也能被檢出。本文就為大家介紹了幾種常用的熒光染料。

免疫熒光
在熒光顯微鏡下,有兩種方法可以顯示興趣蛋白質??梢越柚鷥仍诘臒晒庑盘枺簿褪峭ㄟ^克隆從而在基因層面把一個熒光蛋白和一個靶蛋白聯系起來;又或者借助熒光標記的抗體特異性結合到興趣蛋白質上。對于某些生物學問題來說,后者更為實用甚至更為必要。例如,在組織學樣本的情況下,通常樣本來自不含任何熒光蛋白的生物體,所以不可能使用熒光蛋白。此外,如果有功能性抗體可用,免疫熒光比熒光蛋白技術要快得多,因為熒光蛋白方法必須克隆興趣基因并將DNA轉染到相應細胞中。熒光蛋白的另一個缺點在于其本身就是一種蛋白質。因此細胞內就具備了特定的蛋白質特性,因而可能導致功能紊亂或對所結合的興趣蛋白產生干擾。當然,值得注意的是,熒光蛋白通常是觀察活細胞的方法。

免疫熒光利用抗體對抗原的特異性結合親和力。此處可存在兩種不同的結構。簡單的方法是使用一種熒光標記的抗體,該抗體與興趣蛋白結合,稱為直接免疫熒光。

大多數情況下會使用兩種形式的抗體。第1抗體與靶蛋白結合,自身(1st抗體)沒有熒光標記。但與第1抗體結合的第2抗體(2nd抗體)特異性攜帶熒光染料,這種方法被稱為間接免疫熒光。間接免疫熒光有幾個優點,一方面會存在放大效應,因為不止有一種第2抗體與一種第1抗體結合。另一方面,針對您興趣蛋白,不需要一直用熒光染料標記每種抗體,可以使用市售熒光標記的第2抗體。免疫熒光中廣泛使用的熒光染料是FITC、TRITC或以下提到的幾種Alexa Fluor®染料。

FITC和TRITC
異硫氰酸熒光素(FITC)是一種有機熒光染料,目前仍用于免疫熒光和流式細胞術當中。該染料在495/517nm處存在激發/發射峰,而且可借助其反應性異硫氰酸酯基團與蛋白質上的氨基、巰基、咪唑基、酪氨?;螋驶Y合而與不同的抗體偶聯。它的基本結構,即熒光黃的分子量為332g/mol,常用作熒光示蹤劑。FITC(389g/mol)是最早用于熒光顯微術的染料之一,也是Alexa-fluor488等熒光染料的來源。它的熒光活性源于其自身的大共軛芳香電子結構,在藍色光譜中會被光所激發。

圖 1: 果蠅胚胎發育,綠色: FITC,紅色: TRITC。
經常與FITC配合使用的一種染料是同出一門的TRITC(四甲基羅丹明-5-(和6)-異硫氰酸酯)。與FITC不同,TRITC不是熒光素,而是羅丹明系列衍生物。羅丹明也存在一個大的共軛芳香電子結構,因此可以發出熒光。與FITC不一樣,TRITC(479g/mol)在綠色光譜中被激發,最大值出現在550nm處,最大發射波長為573nm。與蛋白質(如抗體)的結合也基于反應性異硫氰酸酯基團。

即使FITC和TRITC仍在使用,但考慮到兩者屬于相當弱的熒光染料,不建議用于先進的顯微術。兩者的優勢主要還是在于成本低。

花青素
這種相對較小的熒光染料集合源于花青素并因此而得名:Cy2、Cy3、Cy5和Cy7。這些染料都可以通過反應基團與核酸或蛋白質相連。例如,蛋白質標記使用馬來酰胺基團。有趣的是,熒光方面Cy5對周圍的電子環境很敏感,這可用于酶的測定。黏附蛋白的構象變化導致熒光發射的正負變化。此外,Cy3和Cy5可用于FRET實驗?;ㄇ嗨厝玖鲜潜容^古老的熒光染料,也是其它熒光染料的基礎,具有亮度高、光穩定性好、量子效率高等優點。

圖 2: 小鼠轉基因胚胎、肢間體節、E10.5小鼠轉基因胚胎的5個肢間體節: EpaxialMyf5 eGFP;GFP-Alexa 488免疫組化染色;用Desmin-Cy3對胚胎肌肉纖維進行染色,用Hoechst揭示細胞核,自上而下尺寸: 3.5毫米 (a)、800微米 (b)。 樣本提供: Aurélie Jory,法國巴黎巴斯德研究院干細胞與發育以及遺傳與分子細胞生物學研究所 (IGBMC) 成像中心

圖 3: 小鼠成纖維細胞,綠色: F-Actin、FITC,紅色: Tubulin、Cy5,藍色: 細胞核,DAPI。 樣本提供: 德國海德堡馬克斯-普朗克醫學研究所 Günter Giese 博士
DNA染色處理
在熒光顯微術中,不僅蛋白質結構感興趣,而且對核酸也感興趣。有時有必要通過檢測細胞核來確定細胞的確切位置或數量。最常見的DNA染色劑之一是DAPI(4',6-二氨基-2-苯基吲哚),主要與DNA雙螺旋富含A-T的區域結合。與未結合態相比,DAPI在DNA上的熒光強度增加。染料被UV(紫外線)光激發,最大激發波長為358nm。發射光譜較寬,峰值在461nm。弱熒光也可以檢測到RNA結合。在這種情況下,發射轉移到500nm。有趣的是,DAPI能夠滲透完整的細胞膜。因此,該染料既可用于固定細胞也可用于活細胞。

第二種廣泛使用的DNA染色方法是Hoechst染料,最初由化學公司Hoechst AG生產。Hoechst 33258、Hoechst 33342和Hoechst 34580都是鄰苯二甲酰亞胺,具有向A-T富集區插入的趨勢,因此后者不常使用。與DAPI相似,此類染料受到紫外線激發并在455 nm下發射最大值,在無結合狀態下變為510–540 nm。Hoechst染料還具有細胞滲透作用,因此可用于固定細胞和活細胞。與DAPI不同是,Hoechst染料毒性更低。

DNA染色劑碘化丙啶無法透過細胞膜。在細胞培養中,因為該染色劑無法進入完好的細胞內,所以常常被用來區分活細胞和死細胞。碘化丙啶也是一種結合劑,但對不同的堿基沒有特異性。在核酸結合態下,其最大激發波長為538nm,最高發射波長為617nm。未結合狀態下碘化丙啶的最大激發和發射被移到較短的波長和較弱的強度。它也可以在不改變其熒光特性的情況下與RNA結合。要區分DNA和RNA,必須使用足夠的聚合酶。

吖啶橙是一種染料,可以在DNA和RNA之間形成差異區分而無需事先操作。其最大激發/發射對在DNA結合態為502nm/525nm,在RNA結合態為460nm/650nm。此外,該染料還可以進入酸性間室中,如溶酶體。陽離子染料在酸性間室中質子化。在酸性環境中,吖啶橙受藍色光譜中的光激發,而橙色區域的發射*。因為凋亡細胞有很多被吞噬的酸性間室,因此也讓該染料成為了這類細胞常用的標記物。

間室與細胞器特異性染料
在熒光顯微鏡下,對細胞間室如溶酶體或核內體和細胞器如線粒體等進行染色通常較為合理。為此,本節將介紹一組特定染料組合。

觀察線粒體時一種*的方法是使用MitoTracker®。這是一種細胞滲透性染料,具有溫和的巰基活性氯甲基部分。該染料可以通過與半胱氨酸殘基的自由巰基反應,與基質蛋白共價結合。MitoTracker®有不同的顏色和改良成分(見表1),也是Molecular Probes的商標。與傳統的線粒體特異性染色劑如羅丹明123或四甲基玫瑰胺不同的是,在用固定劑破壞膜電位后MitoTracker®不會被洗掉。

根據線粒體染色情況,還有染料標記酸性間室如溶酶體等,稱為LysoTracker。這些是與熒光團相連的膜滲透性弱堿。由于質子化作用,這些堿很有可能與酸性間室有親和力。LysoTracker也有不同的顏色(見表1)。

與溶酶體類似的間室為真菌液泡,如釀酒酵母。這種薄膜包圍的空間也具有酸性。在熒光顯微鏡下觀察它的方法之一是使用苯乙烯基染料,如FM 4-64®或FM 5-95®。

在蛋白質分泌實驗方面,內質網(ER)尤為值得注意。對這種間室進行染色的一種經典染料是DiOC6(3)。這種染料雖然偏向與內質網結合,但也能與線粒體膜等其他膜結合。另一種特定染色ER的方法是使用ER-Tracker,如綠色和紅色ER-Tracker。這兩種染料都是以BODIPY為基礎的染料,與格列本脲(一種磺酰脲酶)有關,能與ER膜上*的ATP敏感鉀通道結合。BODIPY(硼二吡咯甲基)描述了一組相對pH不敏感的染料,這些染料幾乎都不溶于水。這類染料并不是很好的蛋白質標記工具,但用于脂質和膜標記時效果較佳。

ER相近間室 – 高爾基體 – 可用熒光神經酰胺類似物如 NBD C6-神經酰胺和BODIPY FL C5-神經酰胺進行標示。神經酰胺是高爾基體中所富含的鞘脂。

在進一步脂質基染料的幫助下還有可能對特殊的膜區域,如脂質筏等進行染色。這些富含膽固醇的結構域可以通過使用NBD-6膽固醇或NBP-12膽固醇等(Avanti極性脂質)來進行可視化觀察。

除了使用特殊的非蛋白熒光染料來標記細胞間室外,還可以借助于對細胞中不同位置有偏好的蛋白質來染色興趣區域。這些蛋白質可以連接到熒光染料上,并在熒光顯微鏡下顯示出來。這種方法的一個例子是小麥胚芽凝集素(WGA)的使用,它與存在于質膜中的唾液酸和N-乙酰氨基葡萄糖基特異結合。WGA與熒光染料偶聯。用它可以觀察到質膜。

圖 4: Pukinje細胞,三色標記的小鼠小腦皮質矢狀切片。 紅色:anti-calbindin-D28k/Cy3,綠色:anti-GFAP/Cy5,藍色: Hoechst 33258

圖 5: 牛肺內皮細胞。 紅色: MitoTracker® Red CMXRos 標記的線粒體,綠色: 綠色熒光BODIPY® FL phallacidin標記的纖維狀肌動蛋白,藍色: DAPI 標記的細胞核。 此圖像采用3D盲反卷積方法提高了圖像質量
ER相近間室 – 高爾基體 – 可用熒光神經酰胺類似物如NBD C6-神經酰胺和BODIPY FL C5-神經酰胺進行標記。 神經酰胺是高爾基體中所富含的鞘脂。

在其他脂質基染料的幫助下還可以對特殊的膜區域如脂質筏等進行染色。 這些富含膽固醇的結構域可以通過使用NBD-6 膽固醇或NBP-12 膽固醇等(Avanti極性脂質)來進行可視化觀察。

還可以借助于對細胞中不同位置有偏好的蛋白質來染色感興趣區域。 這種方法的一個例子是小麥胚芽凝集素(WGA)的使用,它與存在于質膜中的唾液酸和N-乙酰氨基葡萄糖基特異結合。

功能實驗
“功能實驗"是一個統稱,指的是評估各種功能的標準化實驗,這些功能可以用熒光標志物進行可視化觀察。 這些標志物包括但不限于上述任何標記技術和熒光團。 對于其中的許多功能實驗而言,染色試劑盒可在市場上買到,并且可以輕松用于各種樣本。 功能實驗的一個例子是大家都知道且廣泛使用的活細胞/死細胞實驗。 兩個熒光團分別用于標記活細胞和死細胞。 在同時掌握這兩個值的情況下,就可以評估細胞的總體健康狀況。 將此信息與其他標志物關聯起來還可以加深對底層過程的理解。

熒光染料及其激發和發射波長峰值
以上提到的全部染料都在下表中列出。此外,表中還提到了其他熒光染料及其激發和發射的波長峰值。

圖 6: Alexa 488(綠色曲線)和 Alexa 555(黃色曲線)的熒光發射曲線。 兩個發射光譜的重疊顯而易見。 紅線表示 488 發射光濾光鏡的帶通。
表1

熒光染料樣本示例激發發射
Indo-1, Ca saturated331 nm404 nm
Indo-1 Ca2+346 nm404 nm
Cascade Blue BSA pH 7.0401 nm419 nm
Cascade Blue398 nm420 nm
LysoTracker Blue373 nm421 nm
Alexa 405401 nm421 nm
LysoSensor Blue pH 5.0374 nm424 nm
LysoSensor Blue374 nm424 nm
DyLight 405399 nm434 nm
DyLight 350332 nm435 nm
BFP(藍色熒光蛋白)380 nm439 nm
Alexa 350343 nm441 nm
7-氨基-4-甲基豆素pH 7.0346 nm442 nm
氨基豆素345 nm442 nm
AMCA共軛物347 nm444 nm
豆素360 nm447 nm
7-羥基-4-甲基豆素360 nm447 nm
7-羥基-4-甲基豆素pH 9.0361 nm448 nm
6.8-二氟-7-羥基-4-甲基豆素pH 9.0358 nm450 nm
Hoechst 33342352 nm455 nm
Pacific Blue404 nm455 nm
Hoechst 33258352 nm455 nm
Hoechst 33258-DNA352 nm455 nm
Pacific Blue抗體共軛物pH 8.0404 nm455 nm
PO-PRO-1434 nm457 nm
PO-PRO-1-DNA435 nm457 nm
POPO-1433 nm457 nm
POPO-1-DNA433 nm458 nm
DAPI-DNA359 nm461 nm
DAPI358 nm463 nm
Marina Blue362 nm464 nm
SYTOX Blue-DNA445 nm470 nm
CFP(青色熒光蛋白)434 nm474 nm
eCFP(增強型青色熒光蛋白)437 nm476 nm
1-苯胺鄰苯二甲酸-8-磺酸(1,8-ANS)375 nm479 nm
Indo-1, Ca free346 nm479 nm
1,8-ANS(1-苯胺鄰苯二甲酸-8-磺酸)375 nm480 nm
BO-PRO-1-DNA462 nm482 nm
BOPRO-1462 nm482 nm
BOBO-1-DNA461 nm484 nm
SYTO 45-DNA451 nm486 nm
evoglow-Pp1448 nm495 nm
evoglow-Bs1448 nm496 nm
evoglow-Bs2448 nm496 nm
Auramine O431 nm501 nm
DiO487 nm501 nm
LysoSensor Green pH 5.0447 nm502 nm
Cy 2489 nm503 nm
LysoSensor Green447 nm504 nm
Fura-2, high Ca336 nm504 nm
Fura-2 Ca2+sup>336 nm505 nm
SYTO 13-DNA488 nm506 nm
YO-PRO-1-DNA491 nm507 nm
YOYO-1-DNA491 nm509 nm
eGFP(增強型青色熒光蛋白)488 nm509 nm
LysoTracker Green503 nm509 nm
GFP (S65T)489 nm509 nm
BODIPY FL, MeOH502 nm511 nm
Sapphire396 nm511 nm
BODIPY FL共軛物503 nm512 nm
MitoTracker Green490 nm512 nm
MitoTracker Green FM, MeOH490 nm512 nm
熒光素0.1 M NaOH493 nm513 nm
鈣黃綠素pH 9.0494 nm514 nm
熒光素pH 9.0490 nm514 nm
鈣黃綠素493 nm514 nm
Fura-2, no Ca367 nm515 nm
Fluo-4494 nm516 nm
FDA495 nm517 nm
DTAF495 nm517 nm
熒光素495 nm517 nm
熒光素抗體共軛物 pH 8.0493 nm517 nm
CFDA495 nm517 nm
FITC495 nm517 nm
Alexa Fluor 488肼類-水493 nm518 nm
DyLight 488493 nm518 nm
5-FAM pH 9.0492 nm518 nm
FITC抗體共軛物pH 8.0495 nm519 nm
Alexa 488493 nm520 nm
羅丹明110497 nm520 nm
羅丹明110 pH 7.0497 nm520 nm
吖啶橙431 nm520 nm
Alexa Fluor 488抗體共軛物 pH 8.0499 nm520 nm
BCECF pH 5.5485 nm521 nm
PicoGreendsDNA量化試劑502 nm522 nm
SYBR Green I498 nm522 nm
羅丹明Green pH 7.0497 nm523 nm
CyQUANT GR-DNA502 nm523 nm
NeuroTrace 500/525,綠色熒光 Nissl染色-RNA497 nm524 nm
DansylCadaverine335 nm524 nm
Rhodol Green抗體共軛物 pH 8.0499 nm524 nm
Fluoro-Emerald495 nm524 nm
Nissl497 nm524 nm
熒光素葡聚糖pH 8.0501 nm524 nm
羅丹明綠色497 nm524 nm
5-(和-6)-羧基-2',7'-二氯熒光素pH 9.0504 nm525 nm
DansylCadaverine, MeOH335 nm526 nm
eYFP (增強型黃色熒光蛋白)514 nm526 nm
Oregon Green 488498 nm526 nm
Oregon Green 488抗體共軛物 pH 8.0498 nm526 nm
Fluo-3506 nm527 nm
BCECF pH 9.0501 nm527 nm
SBFI-Na+336 nm527 nm
Fluo-3 Ca2+506 nm527 nm
羅丹明123, MeOH507 nm529 nm
FlAsH509 nm529 nm
鈣綠-1 Ca2+506 nm529 nm
鎂綠507 nm530 nm
DM-NERF pH 4.0493 nm530 nm
鈣綠506 nm530 nm
檸檬黃515 nm530 nm
LysoSensor Yellow pH 9.0335 nm530 nm
TO-PRO-1-DNA515 nm531 nm
鎂綠Mg2+507 nm531 nm
鈉綠Na+507 nm531 nm
TOTO-1-DNA514 nm531 nm
Oregon Green 514512 nm532 nm
Oregon Green 514抗體共軛物 pH 8.0513 nm533 nm
NBD-X466 nm534 nm
DM-NERF pH 7.0509 nm537 nm
NBD-X, MeOH467 nm538 nm
CI-NERF pH 6.0513 nm538 nm
Alexa 430431 nm540 nm
Alexa Fluor 430抗體共軛物 pH 7.2431 nm540 nm
CI-NERF pH 2.5504 nm541 nm
Lucifer Yellow, CH428 nm542 nm
LysoSensor Yellow pH 3.0389 nm542 nm
6-TET, SE pH 9.0521 nm542 nm
Eosin抗體共軛物 pH 8.0525 nm546 nm
Eosin524 nm546 nm
6-Carboxy羅丹明6G pH 7.0526 nm547 nm
6-Carboxy羅丹明6G, hydrochloride525 nm547 nm
Bodipy R6G SE528 nm547 nm
BODIPY R6G, MeOH528 nm547 nm
6 JOE520 nm548 nm
Cascade Yellow抗體共軛物 pH 8.0399 nm549 nm
Cascade Yellow399 nm549 nm
mBanana540 nm553 nm
Alexa Fluor 532抗體共軛物 pH 7.2528 nm553 nm
Alexa 532528 nm553 nm
Erythrosin-5-isothiocyanate pH 9.0533 nm554 nm
6-HEX, SE pH 9.0534 nm559 nm
mOrange548 nm562 nm
mHoneydew478 nm562 nm
Cy 3549 nm562 nm
羅丹明B543 nm565 nm
DiI551 nm565 nm
5-TAMRA-MeOH543 nm567 nm
Alexa 555553 nm568 nm
Alexa Fluor 555抗體共軛物 pH 7.2553 nm568 nm
DyLight 549555 nm569 nm
BODIPY TMR-X, SE544 nm570 nm
BODIPY TMR-X, MeOH544 nm570 nm
PO-PRO-3-DNA539 nm571 nm
PO-PRO-3539 nm571 nm
羅丹明551 nm573 nm
Bodipy TMR-X conjugate544 nm573 nm
POPO-3533 nm573 nm
Alexa 546562 nm573 nm
BODIPY TMR-X抗體共軛物 pH 7.2544 nm573 nm
Calcium Orange Ca2+549 nm573 nm
TRITC550 nm573 nm
Calcium Orange549 nm574 nm
羅丹明鬼筆環肽 pH 7.0558 nm575 nm
MitoTracker Orange551 nm575 nm
MitoTracker Orange, MeOH551 nm575 nm
藻紅蛋白565 nm575 nm
鎂橙550 nm575 nm
R-藻紅蛋白pH 7.5565 nm576 nm
5-TAMRA pH 7.0553 nm576 nm
5-TAMRA549 nm577 nm
Rhod-2552 nm577 nm
FM 1-43472 nm578 nm
Rhod-2 Ca2+553 nm578 nm
四甲羅丹明抗體共軛物 pH 8.0552 nm578 nm
FM 1-43 lipid473 nm579 nm
LOLO-1-DNA568 nm580 nm
dTomato554 nm581 nm
DsRed563 nm581 nm
Dapoxyl (2-aminoethyl) sulfonamide372 nm582 nm
四甲羅丹明dextran pH 7.0555 nm582 nm
Fluor-Ruby554 nm582 nm
Resorufin571 nm584 nm
Resorufin pH 9.0571 nm584 nm
mTangerine568 nm585 nm
LysoTracker Red578 nm589 nm
Lissamine羅丹明572 nm590 nm
Cy 3.5578 nm591 nm
羅丹明Red-X抗體共軛物 pH 8.0573 nm591 nm
Sulfo羅丹明101, EtOH578 nm593 nm
JC-1 pH 8.2593 nm595 nm
JC-1592 nm595 nm
mStrawberry575 nm596 nm
MitoTracker Red578 nm599 nm
MitoTracker Red, MeOH578 nm599 nm
X-Rhod-1 Ca2+580 nm602 nm
Alexa Fluor 568抗體共軛物 pH 7.2579 nm603 nm
Alexa 568576 nm603 nm
5-ROX pH 7.0578 nm604 nm
5-ROX(5-羥基-X-羅丹明,三乙基銨鹽)578 nm604 nm
BO-PRO-3-DNA574 nm604 nm
BOPRO-3574 nm604 nm
BOBO-3-DNA570 nm605 nm
溴化乙錠524 nm605 nm
ReAsH597 nm608 nm
鈣深紅589 nm608 nm
鈣深紅Ca2+590 nm608 nm
mRFP585 nm608 nm
mCherry587 nm610 nm
Texas Red-X抗體共軛物 pH 7.2596 nm613 nm
HcRed590 nm614 nm
DyLight 594592 nm616 nm
乙二胺同二聚體-1-DNA528 nm617 nm
乙二胺同二聚體528 nm617 nm
碘化丙啶538 nm617 nm
SYPRO Ruby467 nm618 nm
碘化丙啶-DNA538 nm619 nm
Alexa 594590 nm619 nm
BODIPY TR-X, SE588 nm621 nm
BODIPY TR-X, MeOH588 nm621 nm
BODIPY TR-X 鬼筆環肽pH 7.0590 nm621 nm
YO-PRO-3-DNA613 nm629 nm
Di-8 ANEPPS469 nm630 nm
Di-8-ANEPPS-lipid469 nm631 nm
YOYO-3-DNA612 nm631 nm
Nile Red-lipid553 nm636 nm
Nile Red559 nm637 nm
DyLight 633624 nm646 nm
mPlum587 nm649 nm
TO-PRO-3-DNA642 nm657 nm
DDAO pH 9.0648 nm657 nm
Fura Red, high Ca434 nm659 nm
別藻藍蛋白pH 7.5651 nm660 nm
APC (allophycocyanin)650 nm660 nm
Nile Blue, EtOH631 nm660 nm
TOTO-3-DNA642 nm661 nm
Cy 5646 nm664 nm
BODIPY 650/665-X, MeOH646 nm664 nm
Alexa Fluor 647 R-藻菊酯鏈霉親和素pH 7.2569 nm666 nm
DyLight 649652 nm668 nm
Alexa Fluor 647抗體共軛物 pH 7.2653 nm668 nm
Alexa 647653 nm669 nm
Fura Red Ca2+435 nm670 nm
Atto 647644 nm670 nm
Fura Red, low Ca472 nm673 nm
羧萘熒光素pH 10.0600 nm674 nm
Alexa 660664 nm691 nm
Alexa Fluor 660抗體共軛物 pH 7.2663 nm691 nm
Cy 5.5673 nm692 nm
Alexa Fluor 680抗體共軛物 pH 7.2679 nm702 nm
Alexa 680679 nm703 nm
DyLight 680678 nm706 nm
Alexa Fluor 700抗體共軛物 pH 7.2696 nm719 nm
Alexa 700696 nm720 nm
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