近期，由于原料疑似遭到蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素的污染，某知名品牌在全球范圍針對旗下多批次嬰兒配方乳粉開展召回。蠟樣芽孢桿菌可以產生腹瀉性腸毒素和嘔吐毒素——腸毒素不耐熱，可通過高溫處理滅活；嘔吐毒素耐熱性強，無法通過常規沖調或煮沸滅活。嬰幼兒由于免疫系統未發育完全，攝入此類毒素后，易導致惡心、嘔吐、胃痙攣等一系列癥狀，嚴重時可引起脫水或電解質紊亂。

針對嬰兒配方食品及其原料在生產儲運過程中，可能產生的蠟樣芽孢桿菌污染風險，市場監管總局于去年3月已發布《嬰幼兒配方乳粉生產企業蠟樣芽胞桿菌風險防控指南》^[1]。常規方法一般采用平板菌落計數法，操作較為繁瑣，且耗時較長。采用菌落測試片可以一定程度上簡化流程，提升效率（Compact Dry BC蠟樣芽胞桿菌測試片，點擊劃線文字即可查看方案)。對比微生物培養法，LC-MS/MS方法的靈敏度和準確性更高，且不局限于活菌，能夠更精準更快速地鎖定毒素污染的風險。

SGLC可提供針對食品中蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素的完整檢測方案，參照中國衛生監督協會團體標準T/WSJD 57-2024 方法并進行優化——采用SHIMSEN Styra HLB對樣品進行凈化，Shim-pack Scepter C18-300 色譜柱進行分離，島津串聯質譜 LCMS-8060NX 檢測分析。對嬰兒配方奶粉空白樣品加標后（添加濃度：0.5 μg/kg），平行 3 份樣品考察回收率和 RSD。結果顯示，蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素的加標回收率為101.2%，RSD為 2.77%，回收率高，重現性好，滿足風險監測的需求。

Shimadzu LC-40B X3 與 LCMS-8060NX 聯用系統；

色譜柱： Shim-pack Scepter C18-300（1.9 μm，2.1×100 mm；P/N：227-31203-05）；

純水機： PR-FP-0120α-MT1（+ 60L 水箱 + 取水器）；

固相萃取小柱： SHIMSEN Styra HLB（200 mg/6 mL；P/N：380-00855-10）；

SHIMSEN Disc HPTFE 針式過濾器（P/N：380-00341）；

LC/MS 認證樣品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

Nichipet Air 移液槍： Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N：00-NAR-10）；

Nichipet Air 10-100 μL（P/N：00-NAR-100）；

Nichipet Air 100-1000 μL（P/N：00-NAR-1000）；

Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N：00-NAR-10000）。

色譜柱：Shim-pack Scepter C18-300（1.9 μm，2.1×100 mm；P/N：227-31203-05）

流速：0.35 mL/min；

進樣量：5 μL

柱溫：40 ℃

流動相：A：0.1%甲酸-2 mmol 乙酸銨水溶液    B：0.1 %甲酸乙腈溶液

梯度洗脫程序如下：

離子化模式： ESI， 正離子掃描；

掃描模式：多反應監測（MRM）
碰撞氣：氬氣

加熱氣：干燥空氣 10 L/min
霧化氣：氮氣(3 L/min)

干燥氣：氮氣 10 L/min
接口溫度：400℃

DL 溫度：250 ℃

加熱模塊溫度：400 ℃

MRM參數如下：

稱取 1g（精確至0.01g）均質后的試樣于 10mL 離心管，加入蠟樣芽胞桿菌嘔吐毒素內標工作液（0.1mg/L）20μL，靜置30min 后，加入5 mL乙腈，渦旋振蕩30s，超聲混勻30min，4℃下12000r/min離心10min。轉移全部上清液至15mL離心管中，加入5.0mL水，渦旋混合30s，待凈化。

SHIMSEN Styra HLB（200 mg/6 mL）

HLB 柱經3.0 mL甲醇，3.0mL純水依次活化，取全部樣品提取液上樣，待上樣液完全過柱后，以3.0mL純水和3.0mL 80%甲醇水依次淋洗小柱， 吹干小柱后，用5.0mL乙腈：甲醇溶液（9:1，V:V）洗脫，收集全部洗脫液，氮氣濃縮至近干，殘渣用1.0mL乙腈復溶，過微孔濾膜供上機測定。

對嬰兒配方奶粉空白樣品加標后（添加濃度：0.5 μg/kg）， 按照上述前處理方法處理后上機，平行 3 份樣品考察回收率和RSD，結果顯示， 蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素加標回收率為101.2%，RSD為2.77%，回收率高，重現性好。 回收率及RSD數據見下表：