電荷異質體

單克隆抗體

近年來，單克隆抗體（mAbs）用于治療癌癥、自身免疫性疾病、心血管疾病、呼吸系統疾病、血液病以及多種感染等嚴重和慢性疾病展現重要作用。由于其巨大的治療價值和商業價值，在過去數年中一直位居十大最暢銷藥物之列，同時單克隆抗體也是獲批最多的生物制藥。

由于生產、加工或儲存過程中的翻譯后修飾（如糖基化、脫酰胺）或化學修飾（如氧化、異構化），導致分子凈電荷改變。同時隨著運輸等的影響，也會出現不同的異質體。電荷異質體的檢測分析方法通常包括：等電聚焦（isoelectric focusing,IEF）凝膠電泳、毛細管等電聚焦（Capillary isoelectric focusing,cIEF）、成像毛細管等電聚焦（Imaged capillary isoelectric focusing,icIEF）、陽離子交換色譜（Cation exchange chromatography,CEX）、陰離子交換色譜（Anion exchange chromatography,AEX）等。

多數單克隆抗體（mAb）等生物治療藥物的等電點（pI）在 7.0-9.0 之間，在中性偏酸的流動相環境（如 pH 5.0-6.5）中呈正電荷狀態，能與陽離子交換色譜柱的固定相高效結合。而陰離子交換色譜需抗體帶負，此時在高pH條件，抗體易發生結構不穩定、聚集等問題，影響分離準確性。

陽離子交換色譜（CEX）已成為表征單克隆抗體電荷異質性的標準方法。陽離子交換色譜（CEX）涉及兩種主要機制，即鹽梯度和pH梯度。在鹽梯度洗脫中，單克隆抗體電荷變體通過與流動相中的鹽離子競爭，從交換位點置換下來。在pH梯度洗脫中，單克隆抗體電荷當pH值達到變體幾乎不帶電或完全不帶電的點時，變體就會從色譜柱中洗脫出來。電荷異質體分析最常用的方法仍然采用鹽洗脫機制。重點關注方法的穩健性，色譜過程中pH值的控制對于保持保留時間穩定和方法穩健性至關重要。離子交換柱本身具有固有的緩沖能力，可在分析過程中控制pH值。

方法介紹

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