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美國Activity Signaling公司重組抗Npas4兔單克隆抗體介紹

2025-10-9　　閱讀(1535)

一、基礎(chǔ)信息

1. 核心產(chǎn)品參數(shù)

- 貨號(hào)：AS-AB18A-100（100μl）、AS-AB18A-300（300μl）

-英文名：Anti-Npas4 Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody

-中文名：重組抗Npas4兔單克隆抗體

- 品牌：Activity Signaling

- 宿主與類型：重組兔單克隆抗體，通過基因工程技術(shù)構(gòu)建，避免動(dòng)物個(gè)體差異

- 形態(tài)與保存：液體形式，1mg/ml濃度溶于PBS，短期4℃保存，長期-20℃分裝凍存

2. 靶標(biāo)蛋白Npas4的生物學(xué)意義

Npas4（Neuronal PAS Domain Protein 4）屬于bHLH-PAS轉(zhuǎn)錄因子家族，是神經(jīng)元活動(dòng)依賴性的即早基因（IEG）產(chǎn)物。其表達(dá)具有高度神經(jīng)元特異性，僅在突觸活動(dòng)激活后數(shù)分鐘內(nèi)迅速上調(diào)，且持續(xù)時(shí)間短暫（約1-2小時(shí)），被認(rèn)為神經(jīng)元活性的黃金標(biāo)志物。Npas4的核心功能包括：

- 調(diào)控突觸可塑性：通過激活BDNF等下游基因，平衡興奮性與抑制性突觸（E/I平衡），參與學(xué)習(xí)記憶和恐懼消退。

- DNA損傷修復(fù)：與NuA4復(fù)合物結(jié)合，在神經(jīng)元活動(dòng)誘導(dǎo)的DNA斷裂位點(diǎn)募集修復(fù)蛋白，維持基因組穩(wěn)定性，延緩神經(jīng)退行性變。

- 晝夜節(jié)律調(diào)節(jié)：與BMAL1等時(shí)鐘基因互作，調(diào)控視交叉上核（SCN）對(duì)光信號(hào)的響應(yīng)。

- 疾病關(guān)聯(lián)：其異常表達(dá)與精神分裂癥、自閉癥、癲癇及阿爾茨海默病等密切相關(guān)。

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二、作用原理

1. 抗體設(shè)計(jì)與制備

該抗體通過重組DNA技術(shù)構(gòu)建，具體流程包括：

- 抗原篩選：以Npas4蛋白C端保守區(qū)域（人源氨基酸597-802）為免疫原，確保跨物種識(shí)別（小鼠、大鼠、人類）。

- 單B細(xì)胞克隆：從免疫兔外周血分離特異性B細(xì)胞，測序獲取抗體可變區(qū)基因。

- 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)：將抗體基因?qū)際EK293細(xì)胞，通過無血清懸浮培養(yǎng)大規(guī)模生產(chǎn)，避免動(dòng)物源污染。

- 嚴(yán)格純化：經(jīng)Protein A親和層析和SEC分子篩純化，純度>95%，內(nèi)毒素水平<0.1EU/μg。

2. 作用機(jī)制

抗體通過雙價(jià)Fab片段特異性結(jié)合Npas4蛋白的PAS結(jié)構(gòu)域，阻斷其與ARNT等伴侶蛋白的相互作用，從而抑制轉(zhuǎn)錄活性。該結(jié)合具有高度選擇性：

- 種屬交叉反應(yīng)性：通過小鼠、大鼠及人類腦組織樣本驗(yàn)證，在WB中均顯示單一87kDa條帶。

- 亞細(xì)胞定位：免疫熒光（IF）實(shí)驗(yàn)證實(shí)其與DAPI共定位，提示抗體可穿透細(xì)胞核膜，識(shí)別內(nèi)源性Npas4。

- 功能驗(yàn)證：在Npas4基因敲除（KO）小鼠中無信號(hào)，證明抗體無交叉反應(yīng)。

三、實(shí)驗(yàn)痛點(diǎn)解決方案

1. 傳統(tǒng)抗體的局限性

- 特異性不足：多克隆抗體因識(shí)別多個(gè)表位，易與PAS家族其他成員（如NPAS1、NPAS3）交叉反應(yīng)，導(dǎo)致WB背景高或IHC假陽性。

- 批次間差異：雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的小鼠單抗可能因細(xì)胞株遺傳漂變，導(dǎo)致不同批次效價(jià)波動(dòng)。

- 驗(yàn)證困難：缺乏KO模型驗(yàn)證的抗體難以排除非特異性結(jié)合，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)論可信度。

2. 本產(chǎn)品的針對(duì)性優(yōu)化

- KO驗(yàn)證黃金標(biāo)準(zhǔn)：在Npas4 KO小鼠腦裂解液中無信號(hào)，排除與其他bHLH-PAS蛋白的交叉反應(yīng)。

- 多應(yīng)用場景適配：支持WB（1:500-1:2000）、IHC（1:100-1:500）、ICC/IF（1:200-1:1000），滿足從分子到組織水平的檢測需求。

- 即用型設(shè)計(jì)：1mg/ml高濃度溶液可直接使用，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的抗體降解。

- 兼容性擴(kuò)展：可與cFos、Arc等其他IEG抗體聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)多標(biāo)記神經(jīng)元活動(dòng)分析。

四、核心優(yōu)勢

1. 特異性與靈敏度的雙重提升

- 高親和力結(jié)合：通過表面等離子共振（SPR）測定，抗體與Npas4的KD值達(dá)10?? M級(jí)，可檢測低至0.1ng的重組蛋白。

- 背景信號(hào)抑制：在IHC實(shí)驗(yàn)中，對(duì)小鼠睪丸等非表達(dá)組織無染色，證明其嚴(yán)格的組織特異性。

2. 批次穩(wěn)定性與生產(chǎn)可靠性

- 基因?qū)用嬉恢滦裕褐亟M抗體的DNA序列恒定，避免雜交瘤細(xì)胞突變導(dǎo)致的批次差異。

- 規(guī)模化生產(chǎn)能力：哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)可實(shí)現(xiàn)快速擴(kuò)產(chǎn)，供貨周期短至2周。

3. 實(shí)驗(yàn)效率優(yōu)化

- 省時(shí)省力：無需預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化稀釋度，推薦起始濃度直接適用于大多數(shù)實(shí)驗(yàn)條件。

- 兼容多種檢測平臺(tái)：與HRP、Alexa Fluor等標(biāo)記二抗配合，支持化學(xué)發(fā)光、熒光顯微鏡及流式細(xì)胞術(shù)。

4. 應(yīng)用領(lǐng)域擴(kuò)展

- 神經(jīng)科學(xué)研究：用于神經(jīng)元活動(dòng)圖譜繪制、突觸可塑性機(jī)制解析及神經(jīng)退行性疾病模型驗(yàn)證。

- 藥物研發(fā)：作為靶點(diǎn)驗(yàn)證工具，評(píng)估候選化合物對(duì)Npas4通路的調(diào)控作用。

- 高級(jí)成像技術(shù)：與組織透明化試劑盒（如CLARITY）聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)全腦3D成像。

五、客戶群體與典型應(yīng)用案例

1. 核心用戶

- 神經(jīng)科學(xué)實(shí)驗(yàn)室：研究突觸可塑性、學(xué)習(xí)記憶及神經(jīng)退行性疾病的機(jī)制。

- 精神疾病研究機(jī)構(gòu)：探索Npas4在自閉癥、抑郁癥等中的分子病理。

- 藥物研發(fā)企業(yè)：開發(fā)靶向Npas4通路的小分子抑制劑或基因療法。

- 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室：研究神經(jīng)元活動(dòng)誘導(dǎo)的基因表達(dá)動(dòng)態(tài)變化。

2. 代表性實(shí)驗(yàn)方案

- WB檢測神經(jīng)元激活：

- 樣本：小鼠海馬組織裂解液（35μg蛋白/泳道）。

- 條件：抗體稀釋1:1000，4℃孵育過夜，HRP標(biāo)記二抗1:5000，ECL顯影曝光30秒。

- 結(jié)果：在野生型小鼠中顯示清晰87kDa條帶，KO小鼠無信號(hào)。

- IHC定位Npas4表達(dá)：

- 樣本：大鼠腦冠狀切片（4%多聚甲醛固定）。

- 條件：抗體稀釋1:200，37℃孵育2小時(shí)，DAB顯色后蘇木精復(fù)染。

- 結(jié)果：特異性染色集中于海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞核，背景極低。

- IF檢測原代神經(jīng)元激活：

- 樣本：體外培養(yǎng)的小鼠皮層神經(jīng)元（經(jīng)KCl刺激30分鐘）。

- 條件：抗體稀釋1:500，與MAP2抗體共染，Alexa Fluor 488標(biāo)記二抗，激光共聚焦顯微鏡觀察。

- 結(jié)果：Npas4信號(hào)與MAP2陽性神經(jīng)元共定位，且刺激組熒光強(qiáng)度顯著高于對(duì)照組。

六、訂貨信息與技術(shù)支持

1. 產(chǎn)品規(guī)格與價(jià)格

- 100μl裝：AS-AB18A-100

- 300μl裝：AS-AB18A-300

- 定制服務(wù)：提供HRP、Biotin等標(biāo)記偶聯(lián)抗體，及大包裝批量采購優(yōu)惠。

2. 訂購流程

-供應(yīng)商：上海起發(fā)

七、總結(jié)

Anti-Npas4重組兔單克隆抗體（AS-AB18A系列）憑借重組技術(shù)的精準(zhǔn)性、嚴(yán)格的KO驗(yàn)證及多場景兼容性，成為神經(jīng)科學(xué)研究的工具。其高特異性、批次穩(wěn)定性及實(shí)驗(yàn)效率，不僅解決了傳統(tǒng)抗體的痛點(diǎn)，更助力研究者在神經(jīng)元活動(dòng)機(jī)制、神經(jīng)退行性疾病及藥物研發(fā)領(lǐng)域取得突破性進(jìn)展。選擇該抗體，即選擇了可靠、高效、前沿的實(shí)驗(yàn)解決方案。

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