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Abcam 人脂蛋白A（Lipoprotein A） ELISA檢測試劑盒技術說明書

2026-4-22　　閱讀(580)

一、產品描述

本產品為Abcam公司進口的單洗脫、90分鐘快速SimpleStep ELISA試劑盒，專門用于準確定量檢測人體生物樣本中脂蛋白A（Lipoprotein A，簡稱Lp(a)）的濃度。

• 產品品牌：Abcam

• 產品貨號：ab212165

• 英文全名：Human Lipoprotein A ELISA Kit

• 中文全名：人脂蛋白A定量檢測試劑盒（酶聯免疫吸附測定法）

• 反應類型：夾心法 ELISA（Sandwich ELISA）

• 包裝規格：96次測試（包含12條預包被微孔板，每條8孔）

• 檢測方法：比色法（Colorimetric），需在450 nm波長下讀取吸光度值

• 物種反應性：特異性識別人源（Human）樣本

• 兼容樣本類型：血清（Serum）、肝素血漿（Heparin Plasma）、檸檬酸鹽血漿（Citrate Plasma）、EDTA血漿（EDTA Plasma）、尿液（Urine）以及腦脊液（Cerebral Spinal Fluid, CSF）

• 性能參數：

? 靈敏度（Sensitivity）：低至 2.5 ng/mL

? 檢測范圍（Assay Range）：17.2 ng/mL - 1100 ng/mL

• 別名參考：Apolipoprotein(a), Apo(a), Lp(a), LPA

該試劑盒采用了Abcam的SimpleStep ELISA單步孵育技術，將傳統的多步溫育與多次洗滌流程大幅簡化，不僅顯著縮短了實驗時間，還有效降低了操作誤差，是心血管疾病及脂類代謝研究的理想工具。

二、產品核心特點

Abcam Human Lipoprotein A ELISA Kit（ab212165）在設計上充分考慮了科研用戶的實際需求，具備以下顯著特點：

1. 極速高效，單步孵育：傳統ELISA試劑盒通常需要多個孵育和洗滌步驟，耗時長達3至5小時。本試劑盒采用的SimpleStep技術允許抗體-抗原夾心復合物在單一緩沖液中同步形成，僅需一次溫育（1小時）和一次洗滌，整個實驗流程可在90分鐘內完成，極大提升了實驗通量。

2. 操作簡便，即開即用：微孔板已預包被了單克隆捕獲抗體，用戶無需進行繁瑣的包被和封閉步驟。試劑盒各組分均經過優化配制，開箱后簡單復溶即可上機操作。

3. 超高靈敏度與寬動態范圍：本試劑盒低可檢測到 2.5 ng/mL 的極低濃度Lp(a)，同時標準曲線的線性范圍覆蓋 17.2 至 1100 ng/mL。無論是基線水平的生理濃度，還是病理狀態下的高濃度樣本，均能實現精準定量。

4. 廣泛的樣本兼容性：該試劑盒不僅適用于常規的血清和各類抗凝血漿（肝素、檸檬酸鹽、EDTA），還特別驗證了尿液和腦脊液等低豐度或特殊基質樣本，為多學科交叉研究提供了便利。

5. 數據質量可靠，發表級認可：該試劑盒憑借其穩定的性能，已被多篇經同行評審的國際學術期刊收錄引用，充分證明了其在真實科研場景中的可靠性與重現性。

三、儲存條件與試劑準備

為了保證試劑盒的最佳性能和最長有效期，請務必遵循以下儲存與準備工作規范。

1. 儲存條件

• 未開封試劑盒：建議在 2°C 至 8°C 的環境下避光保存。在此條件下，所有組分在有效期內均可保持穩定。

• 開封后微孔板條：一旦鋁箔袋被打開，建議將剩余未使用的孔條放回原袋，并盡量擠出袋內空氣，密封后于 2°C 至 8°C 保存。為避免微孔板受潮或污染，建議在一個月內使用完畢。

• 工作液穩定性：濃縮洗滌液（Wash Buffer）稀釋后，若一個月內使用完畢，可存放于 2°C 至 8°C；若需更長時間保存，建議分裝后于 -20°C 冷凍。標準品、檢測抗體混合物等蛋白類組分，復溶后若不及時使用，應分裝凍存于 -20°C 以防止反復凍融。

2. 實驗前試劑準備

• 平衡至室溫：在正式開始實驗前至少 30 分鐘，將所需數量的微孔條、標準品、檢測抗體混合物、樣本稀釋液以及TMB顯色底物從冰箱取出，置于室溫下平衡。這能確保抗原-抗體結合反應的動力學處于最佳狀態。

• 洗滌液配制：若濃縮洗滌液出現結晶析出，請于 37°C 水浴助溶并充分混勻。按照說明書建議的比例（通常為 1:10 或 1:20，具體請參考原液標簽）用去離子水稀釋濃縮洗滌液。稀釋后的洗滌液若出現渾濁，屬正常現象，不影響使用。

• 標準品復溶：加入指定體積的蒸餾水（ddH2O）或標準品復溶緩沖液，輕柔顛倒混勻，切勿劇烈震蕩以免產生過多氣泡。復溶后的標準品母液可立即使用，或分裝凍存。

四、工作原理

Abcam Human Lipoprotein A ELISA Kit（ab212165）基于經典的夾心法酶聯免疫吸附測定（Sandwich ELISA）原理，并融合了Abcam的SimpleStep技術創新。

1. 靶向識別原理

脂蛋白A（Lp(a)）是一種具有致動脈粥樣硬化作用的脂蛋白顆粒，由低密度脂蛋白（LDL）樣顆粒與載脂蛋白(a)（Apo(a)）通過二硫鍵共價連接而成。本試劑盒中的抗體經過精心篩選，能夠特異性識別天然及重組的人源Lp(a)蛋白，而不會與其他高度同源的載脂蛋白（如ApoB-100）或血清中常見的干擾蛋白發生交叉反應。

2. SimpleStep 單步孵育技術機制

傳統夾心ELISA需要先進行樣本孵育、洗滌，再進行檢測抗體孵育。而本試劑盒將包被在微孔板上的捕獲抗體與一個特異性親和標簽偶聯，該標簽能被微孔板表面預包被的單抗所識別。在加樣時，將樣本（或標準品）與含有檢測抗體的抗體混合物同時加入到微孔中。樣本中的Lp(a)抗原會與捕獲抗體及檢測抗體發生競爭性結合，迅速形成“固相捕獲抗體-抗原-檢測抗體"的夾心復合物。這種協同結合效應不僅加快了反應速度，還提高了檢測的特異性。

3. 信號放大與檢測

檢測抗體上標記有辣根過氧化物酶（HRP）。在加入TMB（3,3',5,5'-四甲基聯苯胺）底物后，HRP會催化無色的TMB氧化脫氫，使其轉變為藍色產物。加入酸性終止液后，反應液顏色轉為黃色。最后，使用酶標儀在 450 nm 波長處測定各孔的吸光度（OD值）。OD值與樣本中Lp(a)的濃度成正比，通過將樣本的OD值代入標準曲線，即可計算出樣本中Lp(a)的精確濃度。

五、本試劑盒解決的實驗痛點與科研問題

在脂類代謝與心血管疾病的臨床前研究中，精準定量Lp(a)一直面臨著諸多挑戰。本試劑盒針對這些實驗痛點提供了成熟的解決方案：

1. 解決了傳統ELISA操作冗長、變異系數大的問題

過去，研究人員在使用傳統試劑盒時，往往需要在樣本孵育后進行一次洗滌，再加檢測抗體進行第二次孵育，隨后進行第二次洗滌。這不僅耗費大量時間，而且每次額外的洗滌都會引入人為操作誤差（如浸泡時間不一致、拍板力度不同），導致孔間差異大、重復性差。本試劑盒通過“一加、一洗、一顯色"的極簡流程，將手工操作時間壓縮到最短，極大提升了數據的穩定性和重復性。

2. 克服了特殊基質樣本檢測困難的問題

Lp(a)不僅存在于血液中，在尿液和腦脊液等樣本中也有微量分布。但這些樣本成分復雜，含有大量蛋白酶或異種蛋白，容易干擾免疫反應。本試劑盒經過特殊的緩沖液體系優化，能夠有效抵抗這些復雜基質的干擾。供應商數據顯示，該試劑盒可直接用于尿液、腦脊液以及多種抗凝劑處理的血漿樣本，無需復雜的預處理步驟。

3. 助力揭示Lp(a)在心血管疾病中的致病機制

臨床研究證實，血液中高水平的Lp(a)是心肌梗死（MI）、冠心病（CHD）、腦血管疾病（CVD）、動脈粥樣硬化和卒中的獨立危險因素。本試劑盒的高靈敏度（2.5 ng/mL）使研究人員能夠精準捕捉到低水平變化的Lp(a)，從而深入探討Lp(a)在脂質沉積、炎癥反應以及血栓形成中的精細調控機制，為開發新型降脂藥物或心血管保護療法提供堅實的數據支撐。

六、詳細使用方法與實驗流程

為了獲得最佳的實驗結果，請嚴格按照以下步驟進行操作。建議每次實驗均設置標準品、空白對照和樣本復孔。

第一步：稀釋標準品與制備樣本

將復溶后的標準品母液按倍比稀釋（例如：0 ng/mL, 17.2 ng/mL, 55 ng/mL, 176 ng/mL, 564 ng/mL, 1100 ng/mL），建立標準曲線。同時，根據預實驗結果，將待測血清、血漿、尿液或腦脊液樣本用提供的樣本稀釋液進行適當的稀釋（例如：血清通常稀釋2000倍，血漿稀釋8000至16000倍，具體稀釋倍數需根據樣本預期濃度進行摸索）。

第二步：加樣與單次孵育（Mix & Incubate）

取適量稀釋好的標準品和待測樣本加入微孔中，每孔加入抗體混合物（Antibody Cocktail）。輕輕晃動酶標板使其在室溫下短暫離心，以確保液體均勻覆蓋孔底。蓋上蓋板膜，在室溫（18-25°C）下避光孵育 1 小時。注意：加樣時應盡量避免產生氣泡，以免影響光密度讀數。

第三步：洗滌（Wash）

孵育結束后，棄去孔內液體，將微孔板倒扣在吸水紙上拍打數次，確保殘留液體被吸干。每孔加入 300-350 µL 的 1x 洗滌液，靜置數秒后棄去，如此重復洗滌 3 次。最后一次洗滌后，務必確保孔底無殘留洗滌液。

第四步：加底物顯色（TMB Development）

將TMB顯色底物溶液平衡至室溫。在洗凈的每孔中加入 100 µL 的TMB底物，在室溫下避光孵育 10 分鐘。此時，含有HRP的孔會呈現梯度藍色。

第五步：終止與讀數（Stop & Read）

向每孔加入 100 µL 的終止液（通常為稀硫酸溶液），此時溶液顏色將由藍色轉變為黃色。終止后，需在 30 分鐘內使用酶標儀在 450 nm 波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。若酶標儀支持雙波長檢測，建議使用 540 nm 或 570 nm 作為校正波長以消除背景干擾。

七、數據分析與結果計算

1. 扣除背景值：將標準品和樣本孔的OD值減去零濃度標準品（空白孔）的平均OD值，得到背景校正后的OD值。

2. 繪制標準曲線：以標準品濃度（ng/mL）為橫坐標（X軸），以對應的平均OD值為縱坐標（Y軸），通過四參數邏輯回歸（4-PL）或其他合適的擬合模型繪制標準曲線。

3. 計算樣本濃度：將每個樣本孔的背景校正OD值代入標準曲線方程，計算出對應的濃度。由于樣本在檢測前進行了稀釋，因此最終濃度需要乘以各自的稀釋倍數。

(注：供應商驗證數據顯示，不同基質的樣本在推薦稀釋倍數下的回收率良好，例如：血清0.25%，檸檬酸鹽血漿0.25%，肝素血漿0.25%，EDTA血漿0.125%。)

八、常見問題分析與解決方案

在酶聯免疫吸附測定實驗中，由于操作手法、儀器狀態或樣本性質的差異，有時會遇到一些技術問題。以下是針對本試劑盒可能出現的常見問題的深度排查指南：

問題一：標準曲線線性不佳，R2值偏低

• 可能原因：標準品稀釋操作不準確，導致濃度梯度異常；洗滌不夠，造成孔間交叉污染；顯色時間控制不嚴，各孔顯色不一致。

• 解決方案：標準品稀釋時務必使用校準過的移液器，并更換新的吸頭，確保倍比稀釋的準確性。洗滌時保證每孔注入等量洗滌液，拍板要夠。顯色時必須統一計時，確保所有孔在同一時間加入終止液。

問題二：樣本OD值過低或測不出

• 可能原因：樣本中Lp(a)濃度低于試劑盒靈敏度；樣本保存不當導致抗原降解；樣本稀釋倍數過高。

• 解決方案：檢查樣本儲存條件，避免反復凍融。重新評估樣本中Lp(a)的預期濃度，降低樣本稀釋倍數（例如從2000倍調整為1000倍）重新測定。對于極低濃度的樣本（如腦脊液），可考慮適當加大上樣體積。

問題三：空白孔（Zero孔）OD值偏高

• 可能原因：微孔板受到污染；洗滌液殘留過多；底物溶液被污染或失效。

• 解決方案：確保實驗環境清潔，加樣時避免交叉污染。洗滌后務必在吸水紙上用力拍打，去除殘余液體。檢查TMB底物是否為全新未污染狀態，若底物本身已呈藍色，則不可繼續使用。

問題四：同一樣本復孔間差異過大（CV值 > 15%）

• 可能原因：加樣量不準確；氣泡未排除；酶標板底部不潔凈。

• 解決方案：加樣時槍頭緊貼孔壁緩慢打出液體，避免產生氣泡。孵育前可短暫離心酶標板以聚集液體。在讀數前，用擦鏡紙將微孔板底部的指紋、水漬或劃痕擦拭干凈，以免影響光路透過率。

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