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INDOOR Biotechnologies Inc公司是一家專業(yè)開發(fā)生產(chǎn)用于研究哮喘以及其他過敏性疾病的免疫診斷和相關(guān)生物學(xué)檢測產(chǎn)品的生物技術(shù)公司，IB由兩家子公司組成，一家是位于美國弗吉尼亞的INDOOR Biotechnologies Inc. (IBI)，另一家為位于英國INDOOR Biotechnologies Limited (IBL)。IB的創(chuàng)始人Martin D. Chapman博士曾經(jīng)是美國弗吉尼亞大學(xué)的醫(yī)學(xué)和微生物教授，并曾經(jīng)擔(dān)任過美國NIH、環(huán)保署已及多家生物公司的顧問科學(xué)家。做為環(huán)境過敏原（變應(yīng)原）檢測系統(tǒng)的領(lǐng)導(dǎo)公司，IB生產(chǎn)的一系列過敏原研究和檢測用抗體擁有來自美國弗吉尼亞大學(xué)的*，能夠用于檢測屋塵螨、貓、狗、蟑螂和真菌來源過敏原。 IB開發(fā)生產(chǎn)面向?qū)嶒?yàn)室用戶的過敏原Elisa檢測試劑盒以及面向家庭用戶的過敏原快速檢測試劑盒，利用后者用戶在家中即可于10分鐘之內(nèi)檢測出屋塵螨抗原。這些檢測系統(tǒng)可用于對過敏原環(huán)境暴露水平的評估，也能讓用戶對使用的過敏原隔離清除程序、相關(guān)產(chǎn)品和設(shè)備的有效性進(jìn)行可靠的評估，還可應(yīng)用于過敏原標(biāo)準(zhǔn)化以及相關(guān)產(chǎn)品的研究開發(fā) 上海起發(fā)作為其中國授權(quán)代理長期為中國科研客戶帶來產(chǎn)品，以下是INDOOR Biotechnologies Inc產(chǎn)品一些問題的解答

一、MARIA^TM 試劑盒

Indoor Biotechnologies研發(fā)出一種針對Indoor過敏原（MARIA^TM）的多重芯片，可以在一次檢測中同時測試8個zui重要的Indoor過敏原。芯片同時檢測Der p 1, Der f 1, Mite Group 2, Fel d 1, Can f 1, Rat n 1, Mus m 1 和 Bla g 2。MARIA^TM可以提升高通量系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)分析能力（靈敏度，度和精密度增加），并可以節(jié)省時間和成本。

MARIA^TM技術(shù)與Radix Biosolutions和Luminex Corporation合作研發(fā)，并受到小企業(yè)創(chuàng)新研究所（SBIR）從國家環(huán)境健康科學(xué)研究（NIEHS）所得到的合同支持。結(jié)合了Indoor對過敏原特異的單抗生物技術(shù)產(chǎn)權(quán)與LuminexxMAP技術(shù)的力量，表現(xiàn)了過敏原檢測的工藝水平。

MARIA^TM的性能與實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的重復(fù)性已經(jīng)在多通道研究，包括來自美國和歐洲的9個實(shí)驗(yàn)室中被證實(shí)了。研究對比了32,000個過敏原的檢查結(jié)果，表明MARIA在不同實(shí)驗(yàn)室的重復(fù)性都很好。近期的Indoor的數(shù)據(jù)發(fā)表在EAACI 2010上，在一個ISO17025依從的分析實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果表明MARIA的結(jié)果具有可重復(fù)性，

具體產(chǎn)品：

Premixed 5-plex Multiplex Array for Indoor Allergens (MRA-P5)

描述：

這個試劑盒可以分析Der p 1,Der f 1, Der p 2, Fel d 1和Can f 1。這是一個多通量分析試劑盒，由INDOOR Biotechnologies生產(chǎn)。可以同時定量測定5個常見的Indoor過敏原：房屋灰塵螨Der p1（屋塵螨），Der f 1（粉塵螨），和螨2型及動物過敏原Fel d 1（貓，貓屬）和Can f 1（狗，狗屬）

這個試劑盒可以用于分析環(huán)境樣品中的上述indoor過敏原，如房屋灰塵螨，或空氣過濾器樣本和其他生物學(xué)或環(huán)境學(xué)樣本。

remixed 5-plex Multiplex Array for Indoor Allergens (MRA-P5B)

描述：

這個試劑盒可以用于分析Der p 1，Der f 1，Fel d 1，Can f 1和 Bla g 2。這是一個多通量分析試劑盒，由INDOOR Biotechnologies生產(chǎn)。可以同時定量測定5個常見的Indoor過敏原：房屋灰塵螨Der p1（屋塵螨），Der f 1（粉塵螨），及動物過敏原Fel d 1（貓，貓屬），Can f 1（狗，狗屬）和Bla g 2（德國小蠊）

這個試劑盒可以用于分析環(huán)境樣品中的上述indoor過敏原，如房屋灰塵螨，或空氣過濾器樣本和其他生物學(xué)或環(huán)境學(xué)樣本。

Premixed 8-plex Multiplex Array for Indoor Allergens (MRA-P8)

描述：

這個試劑盒可以用于分析Der p 1,Der f 1, Der p 2, Fel d 1, Can f 1, Bla g 2, Rat n 1 和 Mus m 1。

這是一個多通量分析試劑盒，由INDOOR Biotechnologies生產(chǎn)。可以同時定量測定8個常見的Indoor過敏原：房屋灰塵螨Der p1（屋塵螨），Der f 1（粉塵螨），和螨2型及動物過敏原Fel d 1（貓，貓屬），Can f 1（狗，狗屬），Mus m 1 (小鼠), Rat n 1 (大鼠)和德國蟑螂，Bla g 2 (德國小蠊)。

這個試劑盒可以用于分析環(huán)境樣品中的上述indoor過敏原，如房屋灰塵螨，或空氣過濾器樣本和其他生物學(xué)或環(huán)境學(xué)樣本。

二、ELISA試劑盒

Indoor生產(chǎn)定量檢測ELISA試劑盒范圍廣泛，包裹來源于灰塵滿，貓，狗，小鼠，大鼠，德國蟑螂，花粉和霉的過敏原，并且在超過200篇的科學(xué)論著中都有提到這些試劑盒。

每個試劑盒包含：

l 單克隆捕獲抗體

l 校準(zhǔn)過的過敏原標(biāo)準(zhǔn)品

l 校準(zhǔn)過的生物素化的第二單抗（或兔來源的多克隆抗體）

l 10份（ELISA-10）或20份（ELISA-20）96孔板分析的足量試劑

l 完整的實(shí)驗(yàn)操作步驟和參考資料

應(yīng)用：

l 在環(huán)境和生物樣品中檢測過敏原水平

l 家庭過敏原檢測和監(jiān)測，避免一些繁瑣的操作

l 過敏原操作規(guī)程和設(shè)備控制的售前檢測

l 過敏原標(biāo)準(zhǔn)化

l 過敏原產(chǎn)品，診斷和疫苗的組份

產(chǎn)品列表：

Ø House Dust Mite房屋灰塵螨

Ø 檢測Animal動物過敏原 檢測

Ø Cockroach蟑螂過敏原 檢測

Ø Mold霉菌過敏原 檢測

Ø Pollen花粉過敏原 檢測

Ø FITkit® for Latex Allergens膠乳過敏原檢測FIT試劑盒

三、Purified Allergens 純化的過敏原

 INDOOR有超過50種的天然或重組的過敏原來滿足您的研究需要。過敏原通過親和層析或者和HPLC的方法純化，他們的活性通過檢測單克隆抗體結(jié)合和IgE抗體結(jié)合（重組IgE ELISA）來確定。

應(yīng)用：

l T細(xì)胞功能和抗原遞呈的體外研究

l IgE反應(yīng)&哮喘的動物模型

l 天然免疫

l 抗體檢測，組胺釋放實(shí)驗(yàn)

l 結(jié)構(gòu)學(xué)研究和生物實(shí)驗(yàn)

厭倦處理內(nèi)毒素？請使用LoTox^TM--- 純化的過敏原
Tired of dealing with endotoxin?  Use LoTox™ – Purified Allergens

我們向可能存在內(nèi)毒素干擾細(xì)胞反應(yīng)任何實(shí)驗(yàn)研究者推薦LoTox^TM產(chǎn)品。LoTox^TM過敏原的內(nèi)毒素水平都很低（<0.03EU/µg蛋白），是應(yīng)用于T細(xì)胞，APC和樹突狀細(xì)胞人類和鼠類細(xì)胞研究的理想產(chǎn)品。

產(chǎn)品列表:

Ø LoTox™ Purified Allergens LoToxTM純化過敏原(15個產(chǎn)品 )

Ø Purified Natural Allergens 純化的天然過敏原(24個產(chǎn)品)

Ø Purified Recombinant Allergens 純化的重組過敏原(28個產(chǎn)品)

Ø cDNA Products cDNA產(chǎn)品

INDOOR 有Allergopharma Joachim Ganzer KG (Hamburg, Germany)的許可證協(xié)議，是*可以銷售研究用過敏原cDNA的公司。

在該許可下，INDOOR可以銷售以下cDNA’s:

灰塵螨：Der p 1, Der f 1, Der p 2, Der f 2, Der p 3, Der p 7, Der f 7
貓: Fel d 1

狗: Can f 1, Can f 2

草花粉: Phl p 1, Phl p 5, Lol p 1, Lol p 5, Cyn d 1, Sor h 1

雜草花粉: Amb a 1

過敏原cDNA可應(yīng)要求提供，目前可以提供的上面已用粗體字表示。其他我們生產(chǎn)的重組抗原cDNA請咨詢。

四、Antibodies 抗體

公司有為檢測房屋灰塵螨，狗，貓，蟑螂，和真菌過敏原的單克隆抗體，覆蓋范圍廣泛。

產(chǎn)品列表：

Ø Monoclonal Antibodies 單克隆抗體

Ø Mouse/Human Chimeric Antibodies鼠/人的嵌合抗體

l Mouse anti-Der p 2/human IgE (2B12-IgE)

鼠類抗Der p 1單抗的輕鏈與一個VH結(jié)構(gòu)域與人IgE的重鏈可變（VH）結(jié)構(gòu)域在雜交瘤細(xì)胞中共表達(dá)，收集細(xì)胞培養(yǎng)液上清。

l Mouse anti-Der p 2/human IgG1 (2B12-IgG1)

在雙氯金霉素反應(yīng)器中生產(chǎn)。通過IgG親和層析純化。

l Mouse anti-Der p 2/human IgG4 (2B12-IgG4)

在雙氯金霉素反應(yīng)器中生產(chǎn)。通過IgG親和層析純化。

Ø Biotinylated Monoclonal Antibodies生物素標(biāo)記的單克隆抗體

Ø Polyclonal Antibodies多克隆抗體

五、Allergen Standards 過敏原標(biāo)準(zhǔn)品

定義明確的過敏原對于免疫實(shí)驗(yàn)的校準(zhǔn)是很關(guān)鍵的。Indoor生產(chǎn)的通用過敏原標(biāo)準(zhǔn)品（UAS）包含8個純化的過敏原，是按照歐洲聯(lián)合CREATE項(xiàng)目原則要求制造的。UAS的過敏原通過氨基酸分析確認(rèn)，并且標(biāo)準(zhǔn)品對ELISA和MARIA均適用。

用于其他ELISA試劑盒的過敏原標(biāo)準(zhǔn)品在室內(nèi)生產(chǎn)并經(jīng)過校準(zhǔn)，有可能與國家或參考制劑有不同之處。

Indoor的過敏原標(biāo)準(zhǔn)品只推薦用于免疫分析校準(zhǔn)，作為對ELISA和MARIA^TM試劑盒的補(bǔ)充。這些標(biāo)準(zhǔn)品不推薦用于體外抗體檢測，T細(xì)胞研究，免疫接種或其他用途。請看LoTox^TM產(chǎn)品和其他純化的過敏原的綜合應(yīng)用信息。

產(chǎn)品列表：

Ø Universal Allergen Standard 通用過敏原標(biāo)準(zhǔn)品

Ø House Dust Mite 房屋灰塵螨

Ø Cockroach 蟑螂

Ø Mold霉菌

六、Rapid Test and Dust Collection 快速檢測和集塵器

Indoor研發(fā)了集塵器和取出設(shè)備，使檢測成為一個簡單，便利的過程。我們的產(chǎn)品DUSTREAM^TM集塵器為我們的環(huán)境檢測和Indoor®過敏原檢測服務(wù)提供了*的樣品。

DUSTREAM^TM是一個我們檢測灰塵螨的Ventia™快速過敏原檢測整體組分，消費(fèi)者用快速檢測試劑盒可以在家中用10分鐘完成灰塵螨的檢測。Ventia^TM有大包裝，可作為室內(nèi)空氣質(zhì)量，工業(yè)衛(wèi)生，職業(yè)衛(wèi)生等行業(yè)專業(yè)人士的IAQ-PAK。

產(chǎn)品列表:

Ø Ventia™ Rapid Allergen Test VentiaTM過敏原快速檢測

Ø DUSTREAM™ Collector 灰塵收集器

Ø Mitest Collector 螨收集器

FAQ：

過敏原：

Q1 過敏原應(yīng)該怎樣保存？

A 過敏原應(yīng)該在-20℃冷凍保存。

Q2  過敏原是怎樣純化的?

A 不同的過敏原純化的步驟是不同的。我們通過親和層析，離子交換，疏水性相互作用，用疏水性相互作用聯(lián)合尺寸排除色譜法純化天然的，重組的及LoToX^TM過敏原。

Q3: 提供的抗原是在什么緩沖體系中？

A天然和重組的抗原是在無防腐劑和無載體的磷酸鹽緩沖液中的，pH 7.4，無菌。 LoTox™抗原是在有防腐劑，無載體，無內(nèi)對手，無菌的磷酸鹽緩沖液中的，pH 7.4.。

Q4 LoTox™ 過敏原是什么?

A LoTox™過敏原內(nèi)毒素水平很低，低于0.03 EU/µg 蛋白，是用T細(xì)胞，APC細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞做人類和鼠細(xì)胞研究的理想過敏原。

 Q5 我的T細(xì)胞研究為什么要用 LoTox™ 產(chǎn)品?

A LoTox™ 產(chǎn)品是理想的是因?yàn)樗鼛缀醪缓瑑?nèi)毒素并且可以避免有內(nèi)毒素引起的T細(xì)胞反應(yīng)。

Q6 為什么要用純化的過敏原，而不是過敏原提取物?

A 過敏原提取物是非均質(zhì)的，包含非過敏原的蛋白和其他大分子。研究者經(jīng)常用提取物是因?yàn)樗麄冃枰?/span>T細(xì)胞應(yīng)答，但這些信號的判讀是不可靠的。應(yīng)答的特異性不能被確認(rèn)，很有可能這個應(yīng)答是由非過敏原蛋白引起的，如IgE和IgG抗體應(yīng)答，組胺釋放實(shí)驗(yàn)和動物模型。我們強(qiáng)烈推薦在內(nèi)毒素可能干擾細(xì)胞應(yīng)答的任何細(xì)胞研究中使用LoTox™ 產(chǎn)品。

Q7我應(yīng)該如何選擇天然或重組過敏原？

 A 重組過敏原與其天然的過敏原結(jié)構(gòu)非常近似，與IgE抗體結(jié)合的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也非常近似。畢赤酵母表達(dá)的重組蛋白組成糖分過多可能會干擾與IgE的結(jié)合。我們提供的重組過敏原LoTox™ Fel d 1 (LTR-FD1D), rBla g 2 (RP-BG2) 和 rDer p1 (RP-DP1D)是去糖基化的產(chǎn)品。 

Q8 我如何激活Der p 1的半胱氨酸蛋白酶活性?

 A Der p 1 由 5 mM半胱氨酸或1mM二硫蘇糖醇激活而再生巰基，使其在純化中氧化。(Gough et al. Journal of Experimental Medicine, 1999).

Q9 我應(yīng)用何種底物來檢測 Der p 1的半胱氨酸蛋白酶活性?

A DTT依賴的半胱氨酸蛋白酶活性可以在熒光實(shí)驗(yàn)中通過熒光肽底物Boc-QAR-MCA來檢測。

Q10我需要激活 Der p 絲氨酸蛋白酶活性嗎?

 A 不需要，Der p絲氨酸蛋白酶(NA-DPSP)不需要被激活。 

Q11 我應(yīng)該用哪種底物來測試Der p絲氨酸蛋白酶的活性?

 A DTT依賴的絲氨酸蛋白酶活性可以在熒光實(shí)驗(yàn)中通過熒光肽底物Boc-QGR-MCA來檢測。

MARIA™

 Q1 MARIA™ 試劑盒是冷凍保存還是在室溫下保存?

 A 都不是，試劑盒和所有的試劑都應(yīng)保存在4℃冰箱中，這是很關(guān)鍵的。冷凍會破壞試劑。N

Q2 MARIA™ kit的有效期是多久?

 A 假如保存得當(dāng)?shù)脑挘噭┖性谑盏胶蟮?/span>6個月內(nèi)都說是有保障的。

Q3在實(shí)驗(yàn)前有沒有必要將樣品離心？

A 是的，MARIA™ 是基于微粒的實(shí)驗(yàn)，所以將樣品中異質(zhì)的顆粒減少到zui小是很重要的。

Q4 你們推薦的樣品稀釋比例是多少?

 A 推薦的樣品稀釋比例取決于您樣品的類型及您研究所需達(dá)到的靈敏度。對于房屋灰塵提取物來說，我們推薦將樣品以 1/10, 1/100 和1/10,000稀釋，這將使您達(dá)到較低的檢測限0.1-0.9ng/ml(相當(dāng)于0.002-0.012µg/g灰塵)。

如果您不需要這么高的靈敏度，只需將樣本用1/100和10,000稀釋，靈敏度水平就為1-6ng/ml (灰塵0.02-0.12µg/g)。這樣您每塊板子可以檢測35個樣品。

 空氣過濾器提取物中的過敏原濃度要更低些，分析這類樣本，我們通常不稀釋，或以1/10和1/50稀釋。

Q5 我應(yīng)該如何進(jìn)行系列梯度稀釋?

 A1對于系列稀釋1/10, 1/100 和 1/10,000:

每個樣品準(zhǔn)備三個微量離心管，管1作1/10稀釋，將10µL樣品加入到90µL實(shí)驗(yàn)緩沖液中，管2中加入90µL實(shí)驗(yàn)緩沖液，再加入管1（1/10稀釋）中的10µL液體，渦旋振蕩混勻。管3中加入990µL實(shí)驗(yàn)緩沖液，再加入管2（1/100稀釋）中的10µL液體，渦旋振蕩混勻。50µL of each prepared dilution are used in the MARIA™ 實(shí)驗(yàn)中每種稀釋比例用50µL 。

A2 對于系列稀釋1/10和1/50:

 每個樣品準(zhǔn)備兩個微量離心管:管1中加入90µL實(shí)驗(yàn)緩沖液，再加10µL 未稀釋樣品，渦旋振蕩混勻。管2中加入80µL實(shí)驗(yàn)緩沖液及20µL管1中稀釋過的樣品，渦旋振蕩混勻。

Q6實(shí)驗(yàn)緩沖液必須要滅菌嗎?

 A 是的！Yes! 未滅菌的實(shí)驗(yàn)緩沖液有較高的顆粒負(fù)荷，這會干擾xMAP系統(tǒng)的檢測。它會導(dǎo)致高微粒聚集比率，讀板時間可能會增加3-4倍。

Q7 ELISA洗板機(jī)可以用于MARIA™ 實(shí)驗(yàn)嗎?

A 不可以。翻轉(zhuǎn)板子或重新板中的孔會洗掉微球。所有的洗脫步驟都需要通過多頭抽真空裝置來過濾，試劑盒中有提供濾板。

Q8 在孵育過程中我需要搖動板子嗎?

 A 不需要。在每步孵育前，微粒和事件要通過劇烈吹打使微粒和試劑充分混勻。不需要在孵育過程中晃動。

Q9 在暗室孵育的重要性是什么？我可以將板子放在工作臺上嗎?

A 所有的孵育必須在暗室中進(jìn)行，否則微球會喪失其可被熒光辨別的標(biāo)記。

Q10在孵育過程中我需要用鋁箔紙封住板子嗎?

 A 我們通常用配套的蓋住封住板子，孵育時將其放在空的抽屜中。

Q11 我要用什么儀器讀板?

 A 試劑盒只能與Luminex公司基于激光的熒光分析檢測儀相配對：Luminex® 100, Luminex 200 和其他來自Luminex公司儀器或授權(quán)的經(jīng)銷商包括Bio-Rad 實(shí)驗(yàn)室(赫拉克勒斯, CA )、Qiagen 公司 (巴倫比亞, CA) and MiraiBio (南舊金山, CA))的Luminex儀器。我們使用Bio-Plex 儀器及其Bio-Plex管理軟件(Bio-Rad, Hercules, CA).

 Q12 檢測每個分析需要使用多少微粒？

A我們推薦每個分析物用100個微粒以求的重復(fù)性。

Q13 我應(yīng)選擇怎樣的擬合曲線?

 A我們使用5個參數(shù)的logistic (5PL)曲線擬合。(該擬合曲線可以很容易的在Bio-Plex 管理軟件中找到)

 Q14我應(yīng)該怎樣決定標(biāo)準(zhǔn)曲線中可用的部分?

 A1 如果曲線底端的熒光強(qiáng)度（FI）接近空白對照的FI，則不要使用在空白對照的FI加減3個空白對照標(biāo)準(zhǔn)差之內(nèi)的FI。

A2 我們通常不使用在曲線頂部平直部分內(nèi)FI的數(shù)據(jù)。這意味著我們通常排除Der p 1, Der f 1, Der p 2, Fel d 1, Can f 1, Rat n 1 和Mus m 1測得曲線頂部的2-3個點(diǎn)。Bla g 2 曲線的頂部是可用，然而底部的3-4個點(diǎn)就太接近空白對照數(shù)據(jù)了（看上）。

A3一些軟件包，如Bio-Plex Manager® (Bio-Rad, Hercules, CA) 會在輸出的Excel文檔中自動顯示期望值與實(shí)測標(biāo)準(zhǔn)值。我們使用這個功能作為額外的質(zhì)量控制和*使用值，并且實(shí)測值和期望值的比率在15%之內(nèi)。

A4 變異率（CV%）應(yīng)在兩個標(biāo)準(zhǔn)差之間沒有超過15%。如果不是這樣，您的移液器和移液過程的準(zhǔn)確性需要被檢測。

Q15用不同的樣品稀釋倍數(shù)我得到了不同的結(jié)果，我應(yīng)該怎樣選擇正確的結(jié)果?

 A 從不同的樣品稀釋倍數(shù)獲得不同的結(jié)果，這是取決于您樣品中過敏原的濃度。有很多標(biāo)準(zhǔn)供您選擇正確的結(jié)果。

只選擇落入可用MFI范圍的結(jié)果。如果多于一倍的稀釋倍數(shù)得到相似的結(jié)果：取平均結(jié)果。除去Der f 1 外的所有分析物：如果稀釋倍數(shù)增高而結(jié)果升高：選擇基于zui高稀釋倍數(shù)，含有很少Der f 1的樣品與特定的灰塵提取物中底物出現(xiàn)低水平的干擾，并通過高稀釋倍數(shù)的計算而增大。如果您觀察到這樣的結(jié)果如1/10= 7ng/ml, 1/100=74ng/ml, 1/10,000=4500ng/ml，那么就會出現(xiàn)上面所說的效應(yīng)。在這種情況下，使用1/10稀釋得到的結(jié)果，除非這個結(jié)果達(dá)到~100ng/ml ，若是這個點(diǎn)，則您可以信賴更高稀釋倍數(shù)所得到的結(jié)果。這種異常現(xiàn)象在我們所檢測樣本中的比率<5%，并且只出現(xiàn)在Der f 1低水平的樣本中。

 Q16 我可以獲得 MARIA™ 技術(shù)的培訓(xùn)嗎?
A可以的，我們在美國維吉尼亞州夏洛特維爾的公司中安排了一年兩次的培訓(xùn)課程，請查詢我們的以獲得更多的信息。我們同樣提供基于一年的循環(huán)MARIA™客戶培訓(xùn)

ELISA

Q1 Der p 1 ELISA 試劑盒 EL-DP1和EL-DP1A的區(qū)別是什么?

 A INDOOR 推出的兩個檢測Der p 1 的ELISA試劑盒，實(shí)驗(yàn)中與之結(jié)合的單抗是不同的。

EL-DP1:捕獲單抗為5H8 ，生物素標(biāo)記的單抗為4C1

EL-DP1A: 捕獲單抗為10B9，生物素標(biāo)記的單抗為5H8

 zui廣泛使用的ELISA試劑盒為EL-DP1 (5H8/4C1)生物素4C1單抗在Der f 1 ELISA (EL-DF1)試劑盒中也有使用. EL-DP1推薦用于大多數(shù)常規(guī)灰塵和空氣樣本檢測Der p 1。然而在EL-DP1實(shí)驗(yàn)中一定程度上存在與Der f 1的交叉反應(yīng)，約為2% (參見 Luczynska et al, J Immunol Meth, 1989)。在常規(guī)分析中，這種水平的交叉反應(yīng)不顯著。

EL-DP1A試劑盒與Der f1的交叉反應(yīng)<0.1% ，可應(yīng)用于區(qū)分Der p 1 和Der f 1。舉例來說，過敏原生產(chǎn)商用于確定他們灰塵螨培養(yǎng)的樣本沒有交叉污染。EL-DP1A分析與EL-DP1試劑盒的敏感性水平相同(1-2ng/ml)。

 Q2我們注意到實(shí)驗(yàn)顯影非常慢(并且從未打到過 OD 2.0). 這有問題嗎？

A 您的結(jié)果明顯存在問題。控制曲線在zui高濃度的讀值應(yīng)在OD 2.0-2.4 ，敏感度應(yīng)下至1-4ng/ml。如果您所有的實(shí)驗(yàn)，OD值都沒有達(dá)到2.0 ，那么您實(shí)驗(yàn)的底物和顯色方面可能存在問題。

A 在儲存中所有生物素化的試劑是不是一直處于冷凍狀態(tài)？這會減小這些單抗的敏感性

A 您是否混用了試劑或使用緩沖液片劑？我們發(fā)現(xiàn)一些緩沖液片劑不如新鮮制備的溶液有用。所有溶液通常在4℃保存不超過1個月，并不使用硫柳汞。

A 是否有試劑使用過*作為防腐？這會阻止顯色，因?yàn)?是過氧化物酶的抑制劑。

 A 在為ABTS配置溶液B時，使用的磷酸鈉形式是否正確？磷酸鈉必須是二元的，即Na₂HPO4·7H₂0 

A ABST溶液中是否加了足量的*？每毫升ABST溶液中要加入1µl 30% H2O2。

A鏈霉菌抗生物素蛋白-素過氧化物酶是否被正確稀釋了？

A檸檬酸鹽緩沖液的pH值是否正確? ABTS溶液的pH值應(yīng)為4.2，并在調(diào)節(jié)前就應(yīng)靠近這個pH。如果偏離較遠(yuǎn)，溶液A或溶液B或他們的組成就可能是錯的。

A 洗板機(jī)污染有時可能會妨礙顯色，導(dǎo)致顯色非常緩慢，或達(dá)不到OD 2.0.洗板機(jī)應(yīng)當(dāng)定期清潔。

A直接通過窗戶外的日光曝光會導(dǎo)致上述問題，孵育時讓板子遠(yuǎn)離窗戶。

Q3 我們實(shí)驗(yàn)的背景值很高，這是什么原因引起的?

A 通常當(dāng)二抗是兔的多克隆抗體時，實(shí)驗(yàn)的背景較高。背景值通常在0.15OD左右。其他引起高背景的原因可能是：

A過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG抗體的來源問題。我們使用的為Biosource International和Jackson實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品。這兩個抗體的實(shí)驗(yàn)背景都非常低，BioSource為: 1- (貨號 # ALI4404) Jackson實(shí)驗(yàn)室為: 1- (貨號 # 111-036-045)。

A ABST底物在4°C能保持多久? 在冰箱中通常一個月內(nèi)可以保持穩(wěn)定。如果保存更長的時間試劑可能會變綠，并且出現(xiàn)高背景。ABST溶液在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該差不多是無色的。其他溶液也應(yīng)如此。所有溶液在4°C保存時間通常不超過1個月，并不含硫柳汞。

A 在加入過敏原溶液之前用1%BSA/PBS-T封閉板子30分鐘。

A在某些情況下，出現(xiàn)高背景或在系列稀釋時，zui初的幾個樣本稀釋得太低或檢測不到，卻出現(xiàn)隨機(jī)樣本檢測值高，可能是由于洗板機(jī)的污染。洗板機(jī)應(yīng)當(dāng)定期清洗預(yù)防一些隨即孔污染和堵塞。

A 如果手動洗板，實(shí)驗(yàn)時增加清洗的次數(shù)會有助于降低背景。將各孔*填滿不要溢出，然后小心的將板傾倒不要污染。然后在紙巾上溫和的輕敲以去除剩余緩沖液。

Q4 我們重復(fù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線和/或樣品測試結(jié)果有很高的CV值，這是什么原因?

A 加入ABST后，讀數(shù)確認(rèn)顯色值之前，要自始至終時常通過輕打板子兩側(cè)來溫和搖晃。

A在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)室洗液是非常重要的。確認(rèn)移液器特別是多孔道的在整塊板倍比稀釋時每個孔吸取和排出的量都一樣。并且確認(rèn)在移液時沒有氣泡。

Q5 我們可以保存微孔中包被的抗體嗎？他們能被保存多久，我們應(yīng)該怎樣保存？

 A包被過的板子只能保存很短的一段時間，如一個周末，或長至1周。我們通常將用抗體溶液包被的板子用塑料薄膜抱住放入實(shí)驗(yàn)室冰箱中或冷室中。我們未嘗試過更長的保存時間。

Q6 我們可以用OPD貨TMB來代替ABST嗎，按照Sigma的要求（放在干燥器中，含氬）保存ABST有些困難。

A 您可以用OPD或TMB。我們不將ABST保存在氬中（這個不是很必要），同樣得到了好的結(jié)果。

Q7 灰塵樣本應(yīng)該保存在 4°C嗎，或是要冷凍？

 A 實(shí)驗(yàn)前我們通常將房屋灰塵樣本保存在4°C，但一定提取過后應(yīng)保存在-20°C。

Q8在ELISA中我如何終止酶反應(yīng)?

 A終止反應(yīng)可以在每個孔內(nèi)加入0.1ml 0.002M *。大部分ELISA讀板機(jī)掃描板子的時間在5-20秒內(nèi)，若未終止反應(yīng)，OD值應(yīng)達(dá)到。如果有大量的板子（5-10個板子）需要處理，或因其他原因如拍照需要保存時，可以加入疊氮化合物。

Q9 ELISA孵育的溫度是多少?

 A用捕獲抗體包被ELISA板的溫度為4°C一晚.其他所有步驟都在室溫下進(jìn)行，通常為20-25°C。

 Q10 一個ELISA試劑盒可以分析多少灰塵或空氣樣本？你們推薦分享多少？

A Indoor的ELISA試劑盒對10份或20份的96孔板來說包含足夠的試劑(捕獲mAb, 生物素化的檢測mAb，的過敏原標(biāo)準(zhǔn)品)，每塊板子可以分析的樣品數(shù)量取決于每個樣本的稀釋數(shù)量  

A 重復(fù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線需要4個對照孔(PBS-T)，占用24個孔，每個板剩余的72個孔檢測樣本。一般每個灰塵樣本我們倍比稀釋4個（螨過敏原1/10, 1/20, 1/40, 1/80），這意味著每塊板可以檢測18個樣本。在這樣的條件下一個20塊板的ELISA試劑盒可以分析18 x 20 = 360個樣本。

每個樣本我們稀釋四種，這樣在大多數(shù)情況下，在一個單一實(shí)驗(yàn)中我們可以達(dá)到就>90%的檢測結(jié)果。四個稀釋度會增加每個樣本控制曲線線性部分至少有兩個點(diǎn)的可能性。，果樣本已知過敏原水平范圍，也可以用較少的稀釋梯度。其他樣本，如過敏原提取物，可能含有非常高的過敏原水平，那么在倍比稀釋時，需要增加稀釋的倍數(shù)，從1/100 或 1/1000開始,并可能需要在整個ELISA板上作梯度稀釋。

空氣樣本通常過敏原水平較低，實(shí)驗(yàn)時可以以1/2, 1/4, 1/8, 和1/16來稀釋。

Q補(bǔ)充為什么沒有單獨(dú)檢測Der p 2的ELISA試劑盒呢？

A由于Der p 2和Der f 2為相同抗原表位，所以使用的檢測抗體無法區(qū)分這兩種物質(zhì)。我們有試劑盒EL-D2就是檢測Der p 2和Der f 2過敏原的

Environmental Testing

 Q1我想給Indoor郵寄一些樣本做過敏原分析，你們需要多少量?

A 分析大量灰塵樣本的過敏原水平，我們需要100mg的灰塵。我們近期的研究發(fā)現(xiàn)由于差異的可能性增加，除非至少有10mg的灰塵樣品可用否則不能做過敏原分析。少于10mg可用灰塵不能做分析，會被郵寄退回（NES-不足量樣本）

"Variability introduced into allergen immunoassays during the dust extraction process" 

A 如果用DUSTREAM™ 并在推薦的地區(qū)和時間采樣也只有很少或沒有灰塵，那么持續(xù)采樣直到濾器達(dá)到1/4滿。我們的過敏原結(jié)果不是基于地區(qū)的，而是基于每克灰塵中有多少微克過敏原。

 A對于過敏原提取物，或大量灰塵、空氣過濾器中的的過敏原提取物，我們需要zui少0.5ml，特別是當(dāng)要檢測多個過敏原時。

A 對于空氣采樣錄音帶，整個過濾器要用1mlPBS提取溶液來提取，每個過濾器的結(jié)果據(jù)報道為ng或µg 級。

 Q2我想給Indoor郵寄一些樣本做內(nèi)毒素分析，你們需要多少量

 A分析大量灰塵樣本的內(nèi)毒素水平，我們需要100mg的灰塵。如果少于20mg灰塵是無法做大量灰塵的分析的。如果用DUSTREAM™ 并在推薦的地區(qū)和時間采樣也只有很少或沒有灰塵，那么持續(xù)采樣直到濾器達(dá)到1/4滿。我們的內(nèi)毒素結(jié)果不是基于地區(qū)的，而是基于每克灰塵中的內(nèi)毒素單位。

A 我們收取的樣本是要為提取過的，這點(diǎn)非常重要。提取的過程必須在一個干凈的環(huán)境中進(jìn)行，并且要用含0.05%吐溫不含內(nèi)毒素的水。樣本的提取和分析應(yīng)在同一天進(jìn)行。這些步驟對于防止其他來源的內(nèi)毒素污染非常重要。

A 空氣過濾器樣品也可郵來做內(nèi)毒素分析。整個過濾器在1ml無內(nèi)毒素含0.05%吐溫的水中提取。結(jié)果報告形式為每個過濾器中含有多少內(nèi)毒素單位。我們推薦同時郵寄一個空的過濾器檢測作為使用后過濾器的基準(zhǔn)。

Q3我在我的實(shí)驗(yàn)室中準(zhǔn)備要分析的灰塵樣本，我需要過濾這些灰塵嗎？

A 是否過濾灰塵是由該灰塵的質(zhì)量決定的。我們通常不過濾從床上和柔軟的家具上收集的灰塵。地毯樣本過濾（如用No.45，直徑355um的篩子過濾）來分離纖維和灰塵中的大顆粒。我們推薦用DUSTREAM™收集器，可以大大減少過濾灰塵的需要。用DUSTREAM™收集器收集灰塵樣本后，拆下含有灰塵樣本的尼龍濾器，倒置濾器，輕拍，是灰塵落入一張稱過重的紙上，灰塵會比纖維先從過濾器中出來。

Q4 灰塵樣本和其提取物應(yīng)該怎樣保存？

A灰塵樣本提取前應(yīng)在室溫下，保存在干燥的地方。灰塵提取物應(yīng)在-20℃冰箱中冷凍保存。

Q5INDOOR分析服務(wù)的采樣和委托程序是怎樣的？

A 請看Collecting Dust Samples和Submitting Samples.

A Download Analysis Request Form 

Q6你推薦用什么方法準(zhǔn)備過敏原分析的灰塵提取物 ?

 A請看Sample Extraction Procedure.

 A用于內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)的提取物需要在Indoor分析服務(wù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，同天進(jìn)行分析，以防內(nèi)毒素污染等多重風(fēng)險。這項(xiàng)服務(wù)不應(yīng)郵寄提取物，只要干的樣本如大量灰塵和空氣過濾器。

 
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