該方法又稱變態反應試驗，主要檢測機體變態反應水平的高低。因為變態反應一般在感染后20～25天出現，因此不宜做早期診斷。本方法主要用于動物的大群檢疫。

用游標卡尺測量注射部位皮膚厚度，然后0．1ml布氏桿菌素，在尾褶、肋腹部或頸側部進行皮內注射，48～72h后用游標卡尺重新測量，局部腫脹變硬為陽性反應，但可疑反應要小心解釋。皮膚增加厚度為1．5～2mm或以上時應判為陽性。

本試驗具有*的特異性，這樣布氏桿菌素陽性而血清學陰性的動物可視作感染動物。另外，本試驗結果有助于解釋在無布氏桿菌病的地區感染有交叉反應的細菌而造成的血清學反應。但布氏桿菌素試驗不能檢出所有感染動物個體，因此，在貿易中不能單獨作為正式的診斷試驗，而應有可靠的血清學試驗（如ELISA）進一步證實。

皮內注射布氏桿菌素可誘導細胞反應的暫時性無應答，因此同一動物兩次檢查之間應間隔6周以上。