引言

表征結合事件對于在分子水平上理解任何生理過程都至關重要，現代生化和生物醫學研究依賴于使用等溫滴定量熱法(ITC)精確分析結合反應。ITC是分析分子相互作用最準確的方法，它能揭示藥物效力和穩定性等關鍵屬性。但如果混合不當，ITC數據就會產生偏差、無法使用。

ITC的原理是將滴定劑混入滴定物中，測量結合反應過程中釋放或吸收的熱量，為表征復雜過程提供關鍵的熱力學數據，且無需改變樣品的結構或組成。由于ITC實驗是在樣品混合過程中測量該反應，因此ITC數據的最終準確性和可靠性取決于是否進行了適當的混合。

混合在ITC實驗中的重要性

1. 確保均勻性

ITC實驗中適當的混合攪拌可確保反應物在樣品池中均勻分布。這種均勻性對于使用ITC精確測量所有反應物的相互作用至關重要。如果分布不均，樣品可能會出現局部濃度梯度，即滴定劑存在高濃度區和低濃度區。這種差異會扭曲熱力學讀數，導致對結合親和力和反應動力學的ITC解讀錯誤。

2. 增強反應動力學

當滴定劑在樣品中混合均勻時，實驗的反應會更快、更充分。由于ITC能準確表征結合過程，這些實驗得出的數據質量會更高、更可靠。

ITC實驗中混合不佳的常見錯誤及后果

混合不佳的ITC實驗極有可能導致結果不準確或無法使用。混合太慢或不充分會導致峰值分裂，從而造成分析和數據解讀錯誤。相反，攪拌速率過高可能會損壞樣品，如果操作人員沒有意識到樣品損壞，則會報告錯誤數據。

TA儀器如何助您優化ITC混合

為避免潛在隱患與問題發生，選擇一款專為簡化混合而設計的等溫滴定量熱儀，可以節省無數因實驗失敗或數據丟失而浪費的時間。憑借數十年的成功創新以及幫助客戶解決難題的經驗，TA儀器的Affinity ITC能為您提供更可靠的數據。

樣品池設計

Affinity ITC的圓柱形樣品池能夠縮短配體到達其結合靶標所需的距離。該設計大大提高了混合效率，同時消除了在同類產品中常見的死區和截留氣泡。

攪拌槳

Affinity ITC開創性的FlexSpin™攪拌槳纖細而彎曲，可在超低攪拌速率下實現高效混合。相較于市場上其他ITC產品，Affinity ITC 的攪拌速度比要慢十倍，這一特性使其可以在保護樣品脆弱結構的同時確保最高的靈敏度。配合圓柱形樣品池，FlexSpin™攪拌槳可消除混合死區。經過優化后的FlexSpin™攪拌槳，可實現更好的混合效果、更清晰的峰值和更快的平衡時間。

注射位置

Affinity ITC采用獨特的注射器針頭位置，能將滴定劑輸送到攪拌槳的頂部，實現即時、高效的混合。而其他量熱儀從底部注射滴定劑，因此滴定劑須向上移動才能到達攪拌槳進行混合。使用Affinity ITC，滴定劑能夠更高效地到達目標位置，從而使峰值更清晰，更快地回到基線。

總結

Affinity ITC采用創新的圓柱形樣品池、FlexSpin™攪拌槳和頂部注入位置，三管齊下，全面優化混合效果。這三個特點使Affinity ITC能夠以125 RPM的平均攪拌速率進行混合，顯著低于其他同類型儀器。此外，Affinity ITC的技術可將峰值寬度減少50%之多，從而為用戶提供易于解讀且值得信賴的ITC數據。雖然混合操作看似復雜，但Affinity ITC可為您簡化混合及測試過程，助您獲得可靠的實驗結果。

致謝

本文由TA儀器的Morgan Ulrich和Calliste Scholl撰寫，林明申老師校對。