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(一)透射式電子顯微鏡
透射電子顯微鏡(transmission electron microscope,TEM)的組件包括:
1. 電子槍 發(fā)射電子,由陰極、柵極、陽(yáng)極組成。
2. 聚光透鏡 即電子透鏡,將電子束聚集,可用于控制照明強(qiáng)度和孔徑角。
3. 樣品室 放置待觀察的樣品,并裝有旋轉(zhuǎn)臺(tái),用以改變?cè)嚇拥慕嵌龋€有裝配加熱、冷卻等設(shè)備。
4. 物鏡 為放大率很高的短距透鏡,作用是放大電子像。物鏡是決定透射電子顯微鏡分辨能力和成像質(zhì)量的關(guān)鍵。
5. 中間鏡 為可變倍的弱透鏡,作用是對(duì)電子像進(jìn)行二次放大。通過(guò)調(diào)節(jié)中間鏡的電流,可選擇物體的像或電子衍射圖來(lái)進(jìn)行放大。
6. 透射鏡 為高倍的強(qiáng)透鏡,用將二次放大后的中間像進(jìn)一步放大后在熒光屏上成像。
7. 二級(jí)真空泵 對(duì)樣品室抽真空。
8.照相裝置 用以記錄影像。
由于電子易散射或被物體吸收,故穿透力低,樣品的密度、厚度等都會(huì)影響到最后的成像質(zhì)量,必須制備更薄的超薄切片,通常為50~100 nm。所以用透射電子顯微鏡觀察時(shí)的樣品需要處理得很薄。通常用薄切片法或冷凍蝕刻法制備:
(1)薄切片法 通常以鋨酸和戊二醛固定樣品,以環(huán)氧樹(shù)脂包埋,以熱膨脹或螺旋推進(jìn)的方式推進(jìn)樣品切片,切片厚度20~50 nm,采用重金屬鹽染色,以增大反差。
(2)冷凍蝕刻法 亦稱冰凍斷裂法。將標(biāo)本置于-100?C的干冰或-196?C的液氮中冰凍后,以冷刀急速斷開(kāi)標(biāo)本。斷裂的標(biāo)本升溫后,冰在真空條件下迅即升華,暴露出斷面結(jié)構(gòu),稱為蝕刻。蝕刻完成后,向斷面以45º角噴涂一層蒸氣鉑,再以90º角噴涂一層碳,加強(qiáng)反差和強(qiáng)度。然后用次氯酸鈉溶液消化樣品,剝下碳和鉑的膜,稱為復(fù)膜,能顯示標(biāo)本蝕刻面的形態(tài)。在電鏡下觀察得到的影像即代表標(biāo)本中細(xì)胞斷裂面處的結(jié)構(gòu)。
(二)掃描式電子顯微鏡
掃描電子顯微鏡(scanning electron microscope,SEM)于20世紀(jì)60年代問(wèn)世,目前分辨力可達(dá)6~10 nm。其工作原理是由電子槍發(fā)射的精細(xì)聚焦電子束經(jīng)兩級(jí)聚光鏡、偏轉(zhuǎn)線圈和物鏡射到樣品上,掃描樣品表面并激發(fā)出次級(jí)電子,次級(jí)電子的產(chǎn)生量與電子束入射角有關(guān),即與樣品的表面結(jié)構(gòu)有關(guān)。次級(jí)電子經(jīng)探測(cè)體收集后,由閃爍器轉(zhuǎn)換為光信號(hào),再經(jīng)光電倍增管和放大器轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)來(lái)控制熒光屏上電子束的強(qiáng)度,顯示出與電子束同步的掃描圖像。圖像為立體形象,反映了標(biāo)本的表面結(jié)構(gòu)。
掃描電鏡的標(biāo)本在檢驗(yàn)前,需進(jìn)行固定、脫水處理,再噴涂上一層重金屬微粒,重金屬在電子束的轟擊下發(fā)出次級(jí)電子信號(hào)。
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