SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì) 寶葉生物

時(shí)間：2012/6/14閱讀：2636

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)

本公司研制的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)，使用方便，效果尤佳。其分子量范圍是14400～97400道爾頓。

成分：

成分	分子量（道爾頓）	含量（μg/支）
兔磷酸化酶B/Rabit phosphorglase B	97400	40
牛血清白蛋白/Bovine serum Albumin	66200	40
兔肌動(dòng)蛋白/Rabbit actin	43000	40
牛碳酸酐/Bovine carbonic anhydrase	31000	40
胰蛋白酶抑制劑/Trypsin inhibitor	20100	40
雞蛋清溶菌酶/Hen egg white lysozyme	14400	40

本產(chǎn)品規(guī)格：凍干粉（20次/支）

使用方法：

1、將凍干粉產(chǎn)品先加200ul重蒸水溶解，再加等體積的2倍樣品緩沖液混勻。在沸水浴中變性3-5分鐘，分裝20ul/支，入-20℃保存。使用時(shí)取一支即可上樣。

2、應(yīng)經(jīng)常規(guī)SDS-PAGE電泳后，用考馬斯亮藍(lán)R-250或G-250（coomassie blue R-250 or G250）染色。可得分布均勻、密度相同的6個(gè)蛋白質(zhì)條帶

3、銀染法：將本品以1倍樣品緩沖液稀釋40-50倍后分裝（8ul/支）、-20℃保存。使用前取一支，100℃水浴3-5分鐘即可上樣。經(jīng)常規(guī)SDS-PAGE后銀染，可得分布均勻的6個(gè)蛋白質(zhì)條帶。

建議使用分離膠：14%（T）。

表-2倍樣品緩沖液配制：

試劑名稱	成分	含量/濃度	配制方法
2倍樣品緩沖液	0.5M Tris-HCI,PH6.8	2.0ml	以上溶液混合后加雙蒸水2.5ml至10.0ml，可適當(dāng)調(diào)整溴酚藍(lán)的用量以保證電泳時(shí)的*指示
	丙三醇（甘油）	2.0ml
	20%SDS	2.0ml
	0.1%（w/v）溴酚藍(lán)	0.5ml
	2-b-巰基乙醇	1.0ml

Reagents for SDS Gels

A. 4×Lower gel buffer pH8.8

1.5M Tris 90.83g

0.4%（w/v）SDS 2.00g

dd H₂O to 500ml

用濃HC1調(diào)PH至8.8

B. 4×Upper gel buffer pH6.8

0.5M Tris 12.11g

0.4%（w/v）SDS 0.8g

dd H₂O to 200ml

用濃HC1調(diào)PH至6.8

C. 30% Acrylamide regular

29.2%（w/v）acrylamide 29.2g

0.8%（w/v）Bis-acrylamide 0.8g

dd H₂O to 100ml

加熱使acrylamide*溶解，冷卻后加Bis混合溶解后定容，用濾紙過濾，裝棕色瓶

D. 10×Running buffer

0.25M Tris 30.3g

1.92M Gly 144.1g

1.0%（w/v）SDS 10.0g

dd H₂O to 100ml

（無需調(diào)PH）PH即為8.2-8.3

分離膠總體積12ml 單位：ml 濃縮膠

附圖一：SDS-PAGE 低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)考馬斯亮藍(lán)R-250染色結(jié)果

兔磷酸化酶B 97400道爾頓

牛血清白蛋白 66200道爾頓

兔肌動(dòng)蛋白 43000道爾頓

牛碳酸酐 31000道爾頓

胰蛋白酶抑制劑 20100道爾頓

雞蛋清溶菌 14400道爾頓

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