DSPE 疏水錨定端
雙十八碳飽和硬脂酸疏水尾,強疏水作用力穩定嵌入脂質雙層、LNP 膜結構;在血清、細胞培養液、生理緩沖液中不易從納米顆粒脫落,保障長時間熒光成像信號穩定;可與 DPPC、POPC、DOPE、陽離子可電離脂質任意復配兼容。
PEG 親水間隔鏈(1k/2k/3.4k/5k 全規格可選)
PEG 鏈形成水化 “隱形保護層",降低血漿蛋白吸附、減少單核巨噬系統吞噬,顯著延長納米載體體內循環半衰期;短鏈 1000 Da 適用于快速細胞胞吞實驗,2000 Da 為通用標準型號,5000 Da 適配長效循環活體藥代研究。
末端共價熒光發色團
熒光染料穩定偶聯于 PEG 末端,覆蓋可見光至近紅外完整光譜,包含 FITC、Cy3、Cy5、AF647、CY7 主流熒光基團,兼容普通熒光顯微鏡、共聚焦激光掃描顯微鏡、流式細胞儀、小動物活體成像儀、毛細管電泳熒光檢測系統。
DSPE-PEG2000-CY7(貨號 PG2-DS7-2k,品牌核心爆款)
光譜參數:激發 747 nm、發射 776 nm,處于生物組織近紅外透明窗口,皮膚、臟器自發熒光干擾極低,組織穿透深度可達毫米級;適配小動物活體 IVIS 成像系統,用于腫瘤靶向富集、體內臟器分布、淋巴循環、炎癥病灶示蹤;常規規格 5 mg、10 mg。
DSPE-PEG2000-AF647 / DSPE-PEG2000-Cy5
激發 647 nm/650 nm,適配共聚焦顯微鏡 633 nm 激光通道;多用于體外細胞共聚焦單層成像、流式胞吞定量、血腦屏障 / 腸道通透模型,常與 CY7 搭配做多色雙標對照實驗。
DSPE-PEG2000-FITC(PG2-DSFC-2k)
綠光熒光探針,λex=495 nm、λem=520 nm,普通熒光顯微鏡即可直接觀測;多用于細胞膜簡易標記、脂質體胞吞定性觀察、低成本預實驗,細胞生物學基礎實驗室常備。
DSPE-PEG2000-Cy3
橙紅光熒光,光穩定性優于 FITC,光漂白速率更低,適合活細胞延時動態成像、細胞遷移侵襲追蹤。
DMPE-PEG 熒光系列(短 14 碳脂鏈):膜融合活性更強,適用于內體轉運、siRNA 轉染 LNP 標記;
DOPE-PEG 熒光系列:pH 敏感促膜融合磷脂,酸性內體釋放機制研究專用;
PEG 分子量全覆蓋:1000/2000/3400/5000 Da,按需匹配短循環、長效循環動物實驗方案。
脫鹽純化:G-Biosciences SpinOUT 脫鹽柱去除微量游離熒光雜質,消除成像假陽性;
無菌處理:Merck Millex 0.22 μm PES 無菌濾器過濾;
儲存:配制完成的熒光脂質體 4℃避光保存,有效期不超過 7 天;長期分裝凍存可搭配 WAK CryoSure-DMSO 提升制劑穩定性。
原料組合:DPPC、膽固醇 + Nanocs DSPE-PEG-NH?(靶向修飾)+ DSPE-PEG2000-CY7(示蹤);NHS 活化 RGD / 趨化多肽與氨基磷脂室溫避光偶聯。
實驗流程:薄膜水化制備靶向熒光脂質體,裸鼠肝癌 / 乳腺癌模型尾靜脈注射,IVIS 活體成像連續 72 h 動態追蹤;終點解剖心、肝、脾、腫瘤組織離體熒光定量。
配套功能驗證:Cytodex1 微載體大規模培養穩轉腫瘤細胞,G-Biosciences BCA 試劑盒標準化蛋白上樣;DiscoverX HitHunter cAMP 試劑盒檢測腫瘤 GPCR 受體激活,同步完成熒光成像 + 靶點藥效雙重評價。
實驗結論:PEG 長循環脂質體血液半衰期顯著延長,RGD 靶向組腫瘤熒光富集強度為普通脂質體 3 倍以上,CY7 近紅外波段成像信噪比優勢突出。
試劑搭配:陽離子可電離脂質 + DOPE+Nanocs DSPE-PEG-NH? + DSPE-PEG-CY7;復配包裹熒光素酶 mRNA 構建熒光標記 LNP。
實驗應用:體外轉染 CHO、HEK293 細胞,共聚焦顯微鏡直觀觀察 LNP 細胞內化、內體逃逸過程;小鼠靜脈注射后活體成像監測肝、脾、肺部核酸載體臟器分布,快速對比不同 PEG 分子量 LNP 清除速率,篩選長效循環處方。
雙探針體系:Nanocs DSPE-PEG-AF647 熒光脂質體 + DX70-AF647 熒光葡聚糖;
實驗模型:Millicell 通透小室構建 Caco-2 腸道單層屏障、hCMEC/D3 血腦屏障模型;上室加入混合探針,定時收集下室培養液,酶標儀定量熒光強度,同步計算納米顆粒與大分子葡聚糖跨膜通透系數。
核心優勢:雙熒光通道光譜無重疊,可同步區分納米載體與游離大分子轉運差異,定量重復性優異。
配套試劑:Nanocs DSPE-PEG-Cy5 熒光磷脂、DiscoverX HitHunter cAMP II 試劑盒、G-Biosciences BCA 蛋白定量試劑盒;
實驗邏輯:Cy5 標記多肽脂質體處理穩轉 GPCR 細胞,熒光顯微鏡定量細胞脂質攝取量;裂解細胞檢測胞內 cAMP 濃度,關聯熒光攝取強度與受體激活水平;96/384 孔高通量操作,單次實驗同步獲取遞送效率、靶點藥效兩組數據,大幅縮短多肽制劑篩選周期。
全程避光:熒光基團強光下快速氧化漂白,溶解、旋蒸、偶聯、孵育全程弱黃光 / 避光環境;
溶解溶劑:干粉優先無水氯仿、DMSO 溶解,禁止直接純水溶解干粉,極易發生團聚沉淀;
摩爾添加比例:熒光磷脂摻入量嚴格控制 1–5 mol%,過高會破壞脂質雙層結構,造成制劑粒徑異常增大、PDI 升高;
雜質管控:每批次新配制脂質體建議通過 HPLC 檢測游離熒光染料,避免游離染料造成成像假陽性、定量結果偏差。
熒光背景過高:增加 G-Biosciences 脫鹽柱純化步驟,去除游離染料;
脂質體制備出現渾濁團聚:提升水化溫度至相變溫度以上,充分真空去除有機溶劑;
活體成像熒光信號弱:適當提升 CY7 磷脂摩爾比例至 2~3 mol%,全程避光操作減少熒光淬滅。
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