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供貨周期	一個(gè)月	貨號(hào)	ETU006
應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥

Erythromycin A Production Plasmids 試劑

一、質(zhì)粒構(gòu)成與關(guān)鍵參數(shù)

整套系統(tǒng)含2 個(gè)兼容質(zhì)粒，共攜帶20 個(gè)Erythromycin 生物合成基因，可在E. coli（如 BL21 (DE3)）中直接合成Erythromycin A。

1）pHZT1（骨架：pET28a，5369 bp）

抗性：（Kan）
插入基因（13.2 kb）：

eryBI–BVII（Erythromycin B 環(huán)合成）
ermE（Erythromycin 抗性基因）

啟動(dòng)子：T7；克隆位點(diǎn)：XbaI/SpeI

2）pHZT2（骨架：pET21c，~5.4 kb）

抗性：（Carb）
插入基因（13.2 kb）：

eryCI–CVI（C 環(huán)合成）
eryF/eryG/eryK（后修飾：羥基化、甲基化、糖基化）

啟動(dòng)子：T7；克隆位點(diǎn)：XbaI/SpeI

二、工作原理（E. coli 異源全合成）

宿主：E. coli BL21 (DE3)（提供 T7 RNA 聚合酶）
誘導(dǎo)：IPTG 誘導(dǎo) T7 啟動(dòng)子，同步表達(dá)所有 ery 基因
合成路徑：

Ⅰ 型聚酮合酶（DEBS）→ 6dEB（前體）
后修飾酶（eryF/G/K）→ 羥基化、甲基化、糖基化
終產(chǎn)物：Erythromycin A（Er-A）

優(yōu)勢(shì)：替代天然宿主（糖多孢紅霉菌），周期短、易培養(yǎng)、產(chǎn)量高

三、核心優(yōu)勢(shì)

? 全合成：E. coli 一步生成Erythromycin A，無(wú)需前體
? 高兼容：雙質(zhì)粒（Kan+Carb）穩(wěn)定共存，無(wú)質(zhì)粒排斥
? 強(qiáng)啟動(dòng)：T7 啟動(dòng)子，誘導(dǎo)后高表達(dá)
? 易操作：37℃常規(guī)培養(yǎng)，IPTG 誘導(dǎo)，無(wú)需特殊培養(yǎng)基
? 可改造：位點(diǎn)清晰（XbaI/SpeI），便于基因編輯 / 路徑優(yōu)化

四、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方案

1. 轉(zhuǎn)化

感受態(tài)細(xì)胞：BL21 (DE3)
共轉(zhuǎn)化：pHZT1（Kan?）+ pHZT2（Carb?）
篩選：LB 平板（50 μg/mL Kan + 100 μg/mL Carb），37℃過(guò)夜

2. 培養(yǎng)與誘導(dǎo)

單菌落→LB 液體（同抗性），37℃搖至 OD???=0.6–0.8
加 IPTG（1 mM），28℃誘導(dǎo) 16–24 h（低溫利于折疊）

3. 檢測(cè)

發(fā)酵液→LC-MS 或抑菌圈法（枯草芽孢桿菌）驗(yàn)證Erythromycin A

Erythromycin A Production Plasmids 試劑

應(yīng)用場(chǎng)景

異源合成：E. coli 生產(chǎn)Erythromycin A，替代天然發(fā)酵
途徑工程：改造 ery 基因簇，提高產(chǎn)量 / 生成衍生物
藥物開(kāi)發(fā)：構(gòu)建Erythromycin 類(lèi)似物庫(kù)，篩選新型抗生素
代謝研究：聚酮合成、后修飾機(jī)制研究

上海寶葉生物科技有限公司

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