細胞培養(yǎng)上清 細胞因子檢測 樣本處理方法

一、采樣時機與基礎準備

1. 待細胞培養(yǎng)至目標時間點，輕柔吸取上清，避免吸起細胞、細胞碎片。

2. 全程低溫操作，優(yōu)先冰上處理，減少細胞因子降解。

3. 提前備好離心管、凍存管、移液槍，耗材無內(nèi)毒素、無蛋白酶污染。

二、離心去除雜質(zhì)（核心步驟）

1. 將收集的培養(yǎng)上清轉移至離心管，4℃、3000–4000 rpm 離心 10–15 min。

2. 目的：沉淀懸浮細胞、死細胞及碎片，防止干擾檢測、堵塞檢測板孔。

3. 離心后小心吸取上層清亮液體，切勿觸碰底部沉淀。

三、分裝與標記

1. 按單次實驗用量分裝（建議50–200 μL / 管），避免反復凍融。

2. 管壁清晰標注：樣本名稱、組別、采樣時間、處理日期。

四、保存條件

1. 短期保存（1–3 天內(nèi)檢測）

2. 長期保存（超過 3 天）

• 立即放入 -20℃ 冷凍；長期存放（1 個月以上）建議 -80℃。

• 嚴格避免反復凍融，反復凍融會大幅降低細胞因子濃度，造成結果偏差。

五、檢測前復融處理

1. 取出凍存樣本，室溫自然融化，禁止水浴高溫加熱。

2. 融化后短暫輕柔顛倒混勻，再次 4℃、3000 rpm 短時離心 3–5 min，去除解凍析出的微量雜質(zhì)。

3. 混勻后即可上機 / 加樣檢測。

六、關鍵注意事項

1. 若培養(yǎng)液含血清、酚紅：常規(guī) ELISA 等免疫檢測一般不受影響；部分高靈敏度試劑盒建議設置對應空白對照。

2. 全程避免劇烈震蕩、泡沫過多，部分細胞因子易失活。

3. 樣本出現(xiàn)渾濁、絮狀沉淀、變色，建議廢棄。

4. 如需運輸樣本：干冰低溫運輸，保證全程冷凍狀態(tài)。

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