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詳細介紹
產(chǎn)品分類：細胞染色
儲存條件：—20℃,避光,12個月
用途：流式細胞術(shù)檢測細胞周期、細胞凋亡
注意事項：自備乙醇70%和PBS,流式細胞儀488nm處檢測紅色熒光
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒 | 50T | FS-R6645 |
配制與標定的實驗原理：
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；
EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。
配制步驟：
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。
實驗方法與判定：
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。
3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。
4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法：
1. 常用篩選濃度
注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。
一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。
1） 第一天：未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。
2） 根據(jù)細胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3） 第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4） 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5） 按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1） 轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3） 篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
葛根-6''-O-木糖苷 Basic Fuchsin促卵泡激抗體包裝1g
葛根芹菜糖苷 Bromothymol blue神經(jīng)元核抗原抗體包裝5g
蛤蚧（標準品） Bismuthiol IIFAM135B蛋白抗體包裝1g
油（標準品） Bismuthiol II“衰老關(guān)鍵蛋白"抗體包裝5g
隔山消（標準品） Beryllon II促卵泡激受體抗體包裝25g
根皮苷（標準品） Bromopyrogallol red成纖維生長因子12抗體包裝5g
根皮(標準品) Basic Fuchsin成纖維生長因子14抗體包裝100ml
功勞木（標準品） Brilliant Yellow腦型脂肪結(jié)合蛋白抗體包裝25ml
鉤藤(鉤藤)（標準品） Congo redFAM96B蛋白抗體包裝5ml
鉤藤堿(標準品) Calconcarboxylic acid腦胚胎鋅指樣蛋白1抗體包裝1g
鉤吻（標準品） Calconcarboxylic acidFAM29蛋白抗體包裝25g
鉤吻子（標準品） Chlorophenol redMaFF相關(guān)蛋白抗體包裝5g
狗脊（標準品） Calmagite7抗體包裝100g
枸杞子（標準品） CadionFEM1B抗體包裝25g
枸櫞血根堿 Cupferron纖維母生長因子3抗體包裝5g
黑曲霉Aspergillus│niger var. niger Tiegh. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品狀瘤病抗體試劑盒千金藤;Cepharanthine
螺卷毛殼Chaetomium│cochliodes 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR狀瘤病抗體試劑盒秦皮乙;Esculetin
乳乳球菌乳亞種Lactococcus│lactis subsp. lactis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品狀瘤病18型衣殼蛋白L1試劑盒秦皮;Fraxetin
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒T7 tag(recombinant T7-tagged proteins) T7 tag標簽抗原規(guī)格： 0.5mg
V5 tag(recombinant V5-tagged protein) V5 tag多肽抗原規(guī)格： 0.5mg
KT3 tag KT3 tag標簽抗原規(guī)格： 0.5mg
VSV-G tag(vesicular stomatitis virus glycoprotein) VSV-G tag標簽抗原規(guī)格： 0.5mg
HLA-DR(human leukoyte Antigen DR) HLA-DR抗原規(guī)格： 0.5mg
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