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詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 人胎盤間充質干細胞 | 商品貨號 | A01X1492 |
組織來源 | 胎盤組織 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
種屬來源 | 人 | 傳代特性 | 可傳5代左右；3代以內狀態良好 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
包被條件：
培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介 |
人胎盤間充質干細胞細胞分離自胎盤組織；胎盤(placenta)是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內膜聯合長成的母子間交換物質的過渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構成。胎兒在子宮中發育，依靠胎盤從母體取得營養，而雙方保持相當的獨立性。胎盤還產生多種維持妊娠的激素，是一個重要的內分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長出一些輔助結構如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結合，以達到母子間物質的交換，這樣的結構稱假胎盤。胎盤間充質干細胞(mesenchymal stem cell，MSC)是一種多能干細胞，是具有自我復制能力的多潛能細胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞像APSC多能細胞。在胚胎發育中來源于中胚層。在機體正常的組織損傷修復過程中，MSC是一種重要的參與組織再生的細胞庫。在組織損傷引起的特殊信號作用下，MSC遷移到受損部位，在局部聚集增殖，依據不同的損傷信號沿著不同途徑分化。MSC易于分離擴增，體外倍增能力旺盛，能保持其多向分化能力。因此，MSC是一種實用的組織修復種子細胞。相較于其他干細胞，胎盤間充質干細胞具有來源方便，細胞數量充足，易于分離、培養、擴增和純化，傳代擴增多代后仍具有干細胞特性。胎盤是干細胞的佳來源。 |
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態呈成纖維細胞樣，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；
3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品：
人骨肉瘤細胞，HOS細胞
人骨肉瘤細胞，MG-63細胞
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人骨髓漿細胞瘤株，AMO-1細胞
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人橫紋肌瘤細胞，A673細胞
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人橫紋肌肉瘤細胞，RD細胞
人紅白血病細胞，HEL細胞
耳念珠菌定量菌株Quantitative strains of candida auris Satoh et Makimura
耳葡萄球菌Staphylococcus auricularis
發根根瘤菌Rhizobium rhizogenes
發光桿菌屬Photobacterium sp.
發光假蜜環菌（亮菌）Armillaria tabescens
發酵畢赤酵母Pichia fermentans
發酵接合酵母Zygosaccharomyces fermentati
發酵乳桿菌定量菌株Quantitative strains of lactobacillus fermentum Beijerinck
樊慶生氏紅球菌Rhodococcus qingshengii
泛酸枝芽孢桿菌Virgibacillus pantothenticus
人胎盤間充質干細胞泛養副球菌Paracoccus pantotrophus
紡錘雷素鏈霉菌Streptomyces netropsis
紡錘形賴氨酸芽孢桿菌Lysinibacillus fusiformis
放射形根瘤菌Rhizobium radiobacter
放射型根瘤菌Rhizobium radiobacter
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