產品介紹：

Elabscience生物素標記試劑盒提供了生物素標記所需全部試劑，用于含有氨基（NH₂-）抗體的標記。生物素已經活化，可直接使用，每個試劑盒足以完成3次標記，每次可標記0.2-2mg。試劑盒中包括3個用于抗體標記脫鹽的Filtration tube，不用透析，操作簡便，熟練操作90min可完成整個標記過程。

產品特點：

1.  試劑全面本試劑盒提供了生物素標記所需全部試劑。

2.  快速整個過程僅需90min。

3.  方便通過Filtration tube即可脫鹽，無需透析或者凝膠過濾。

4. 使用靈活既可用于微量標記又可大量標記，每次可標記0.2-2mg。

5.  理想的標記效果已經優化，確定了zui適的標記比例，降低由于過度標

記而失活的可能性。

產品組成：

標記過程需要儀器：

1.  10ul，50ul，200ul，1000ul可調高精度移液器

2.  恒溫箱（37℃）

3.  離心機（離心力可達到12,000×g）

儲存條件：

本試劑盒未開封前在2-8℃可穩定保存一年

生物素標記反應原理：

NH₂-Reactive Biotin專一的與伯胺反應（N-末端及賴氨酸殘基側鏈）形成穩定的酰胺鍵

操作過程：

實驗前準備：

1.仔細閱讀使用說明書。

2.計算待使用NH₂-Reactive Biotin的量。

3.提前20min從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫（注：不需要用到的NH₂- Reactive Biotin繼續放置冰箱中）。

4.溶解NH₂-Reactive Biotin：加入30ulDMF至NH₂-Reactive Biotin瓶中，靜置10min，待其充分溶解，此時生物素的濃度為10mM。

操作步驟：（本操作步驟按照1mg的量進行標記）

1.取1mg待標記抗體于Filtration tube中，并加入相應體積的Labeling Buffer，使抗體的終濃度為2mg/ml，12,000 x g離心10min。（注：①Filtration tube的zui大體積為0.5ml②待標記抗體濃度低時，可先超濾離心一次）

2. 加入13.3ul NH₂-Reactive Biotin 和適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使終體積為0.5ml，并輕輕吹打混勻。放入37℃恒溫箱中避光溫育30min。12,000 x g離心10min。

3. 加入適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使終體積為0.5ml，并輕輕吹打混勻，12,000 x g離心10min。

4. 操作3重復一次。

5. 加0.2ml Labeling Buffer至Filtration tube中，輕輕吹打。將濾芯倒轉放置于另一個離心管中，6,000 x g離心10min。

6. 收集離心管中的溶液，即為生物素標記的抗體。

注意事項：

1.本試劑盒也可標記其它含有氨基（NH₂-）的抗原、HRP、多肽，具體標記比例根據待標記物中氨基的數量確定。

2.  DMF要密封干燥保存，使用完立即用封口膜封緊。

3.  操作步驟5中，可用Labeling Buffer作為回收標記抗體的緩沖液，也可使用其它任何緩沖液或保護劑。

4.本試劑盒未開封前的有效期為一年，請在有效期內使用。

5.本試劑盒提供的為10KD的Filtration tube，標記抗原或多肽請注意分子量的大小。

6. 在步驟2中，標記其它抗體時，我們應先控制抗體的終濃度為2mg/mL，然后再根據抗體的量計算應加入NH2 - Reactive Biotin的體積。