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介紹下圓二色光譜儀的使用方法
圓二色光譜儀（CD）主要用于分析手性分子、蛋白質(zhì)/核酸二級(jí)結(jié)構(gòu)、手性配合物等，操作精度要求高。以下是標(biāo)準(zhǔn)、完整的使用方法（適用于主流機(jī)型如Jasco、AppliedPhotophysics、Chirascan等）。
一、開(kāi)機(jī)前準(zhǔn)備（關(guān)鍵）
1.環(huán)境檢查
室溫：20–25℃，濕度**<60%**，無(wú)強(qiáng)光、無(wú)振動(dòng)、無(wú)強(qiáng)磁場(chǎng)。
氮?dú)獯祾撸ㄟh(yuǎn)紫外<210nm必需）：
打開(kāi)氮?dú)馄?，流?–10L/min吹掃5–10min，再降至2–5L/min維持。
目的：排除氧氣（氧氣吸收遠(yuǎn)紫外光導(dǎo)致基線漂移、信號(hào)失真）。
2.儀器開(kāi)機(jī)順序
打開(kāi)穩(wěn)壓電源→打開(kāi)儀器主機(jī)→打開(kāi)電腦→啟動(dòng)軟件。
光源預(yù)熱：
氙燈/氘燈：預(yù)熱**≥30min**，嚴(yán)禁頻繁開(kāi)關(guān)（壽命影響大）。
自檢：軟件自動(dòng)校準(zhǔn)光學(xué)系統(tǒng)、基線、波長(zhǎng)精度。
二、樣品制備（決定成?。?/div>
1.樣品要求（通用）
純度：蛋白/核酸**>95%**，無(wú)雜質(zhì)、無(wú)沉淀。
濃度：
蛋白：0.1–1mg/mL（遠(yuǎn)紫外190–250nm）。
小分子：吸光度A=0.5–1.5（1cm光程）。
溶劑/緩沖液：
遠(yuǎn)紫外：用磷酸鹽、Tris，不含Cl?、DMSO、DMF、丙酮（強(qiáng)紫外吸收）。
必須超純水配制，0.22μm濾膜過(guò)濾、超聲除氣泡。
2.比色皿選擇
遠(yuǎn)紫外（<250nm）：必須石英比色皿（1mm/0.1mm/0.01mm）。
可見(jiàn)光：可用玻璃或石英。
清潔：
先用乙醇/丙酮→超純水沖洗→無(wú)塵紙輕擦。
嚴(yán)禁有指紋、劃痕、殘留液。
三、參數(shù)設(shè)置（核心）
1.波長(zhǎng)范圍
蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)：190–260nm
核酸：200–320nm
手性小分子/配合物：200–700nm（按需）
2.關(guān)鍵參數(shù)（推薦）
掃描速度：20–100nm/min（蛋白常用50nm/min）
積分時(shí)間：1–5s（越長(zhǎng)信噪比越高，越慢）
狹縫寬度：1–2nm（兼顧分辨率與強(qiáng)度）
累積次數(shù)：3–5次（平均降噪）
溫控（變溫實(shí)驗(yàn)）：25–90℃，升溫速率1℃/min
四、基線校正（必做）
裝入空白緩沖液（與樣品溶劑完全一致）。
運(yùn)行基線掃描（Background）。
基線應(yīng)平坦、無(wú)雜峰；若有毛刺/漂移，重新清潔比色皿、吹掃氮?dú)狻?/div>
五、樣品測(cè)量
小心注入樣品：無(wú)氣泡、無(wú)顆粒。
放入樣品室，蓋緊遮光蓋。
啟動(dòng)樣品掃描（Sample）。
觀察HT高壓值：正常**<600–700V**；過(guò)高表示濃度太高/光程太長(zhǎng)/透光差，需稀釋。
每個(gè)樣品重復(fù)2–3次，取平均。
六、數(shù)據(jù)處理（標(biāo)準(zhǔn)流程）
背景扣除：樣品譜-空白基線=純CD信號(hào)。
單位換算（蛋白常用）：
平均摩爾橢圓度[θ](deg?cm²?dmol?¹)
[θ]=(θ_obs×100×MW)/(c×l)
θ_obs：實(shí)測(cè)值（mdeg）
MW：分子量（g/mol）
c：濃度（mg/mL）
l：光程（cm）
平滑、歸一化，導(dǎo)出圖譜。
二級(jí)結(jié)構(gòu)擬合（蛋白）：用CDNN、CAPITO、CDToolX等軟件估算α-螺旋、β-折疊、無(wú)規(guī)卷曲比例。
七、關(guān)機(jī)流程
取出比色皿，立即徹底清洗。
軟件：關(guān)閉光源→退出程序。
儀器：關(guān)主機(jī)→關(guān)氮?dú)?rarr;關(guān)穩(wěn)壓電源。
清潔樣品室，蓋好防塵罩。
八、簡(jiǎn)易速記（實(shí)驗(yàn)臺(tái)可用）
氮?dú)獯祾?rarr;開(kāi)機(jī)預(yù)熱30min
配樣：過(guò)濾、除氣泡、A=0.5–1.5
石英比色皿→基線→樣品掃3次
扣背景→換算單位→擬合結(jié)構(gòu)
立即洗皿→關(guān)燈→關(guān)機(jī)
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