關(guān)于ADC凍干制劑

ADC(Antibody-Drug Conjugate，抗體藥物偶聯(lián)物)是一類將單克隆抗體與細(xì)胞毒性小分子藥物通過化學(xué)連接子共價(jià)偶聯(lián)而成的新型靶向抗腫瘤藥物。ADC是一種高度復(fù)雜的生物大分子，由于其同時(shí)具備抗體（蛋白質(zhì)）的不穩(wěn)定性；小分子毒素的化學(xué)不穩(wěn)定性；連接子的水解敏感性，三者疊加，導(dǎo)致ADC在液體狀態(tài)下極難長(zhǎng)期保持穩(wěn)定，凍干制劑可顯著提升其長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性。

殘余水分作為凍干制劑的關(guān)鍵質(zhì)量控制指標(biāo)之一，一般使用經(jīng)典的卡爾費(fèi)休滴定法測(cè)定。ADC凍干制劑通常采用密封玻璃西林瓶包裝，以固體粉末儲(chǔ)存，水分含量目標(biāo)值一般為0.5-2%，使用卡爾費(fèi)休容量法或庫(kù)侖法均可，具體方法的選擇取決于待測(cè)樣品的水分含量及可獲取的樣品量。卡爾費(fèi)休滴定法測(cè)定過程中遇到的困難往往源于樣品溶解度有限，在某些情況下還需考慮副反應(yīng)的影響。根據(jù)凍干制劑組成及性質(zhì)的不同，需采取相應(yīng)措施以確保卡爾費(fèi)休測(cè)定不受干擾。

目前，在各國(guó)的藥典中（例如：USP <921>，EP <2.5.12>，中國(guó)藥典四部通則<0832 水分測(cè)定>等），卡爾費(fèi)休滴定法均被列為水分測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)方法。與其他水分測(cè)定方法相比，卡爾費(fèi)休法是基于化學(xué)定量反應(yīng)的水分測(cè)試方法，具有專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高和適用范圍廣等優(yōu)勢(shì)。

實(shí)驗(yàn)技巧和建議

由于凍干制劑的水分含量極低（例如：每支中水分含量?jī)H100µg），同時(shí)具有較強(qiáng)的吸濕性，因此水分測(cè)定需嚴(yán)格按照規(guī)范操作，條件允許時(shí)應(yīng)在手套箱中稱量樣品，以排除環(huán)境空氣中濕度的影響。特別是凍干粉極易吸潮，操作不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏高，這是最常見的誤差來源之一。

凍干制劑直接進(jìn)行水分測(cè)定很難保證全部溶解且不發(fā)生副反應(yīng)，外部萃取法是其最合適的水分測(cè)試方法。外部萃取法是通過無水甲醇等溶劑將待測(cè)樣品中的水分萃取出來，通常適用于溶解性較差、水分分布不均勻和輔料有干擾的待測(cè)樣品水分含量測(cè)試。

容量法滴定可使用單組分試劑（可通過增加溶劑提高待測(cè)樣品的溶解性）或雙組分試劑（pH值范圍更寬，反應(yīng)更快，滴定度更穩(wěn)定）。

庫(kù)侖法分析僅能在樣品經(jīng)外部萃取后再進(jìn)行，建議庫(kù)侖滴定池陽(yáng)極室中的已滴定溶液可作為溶劑或萃取劑使用；其優(yōu)勢(shì)在于無需考慮溶劑空白值，從而獲得更準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。

此外，凍干粉固體樣品也可以采用卡氏加熱爐法結(jié)合庫(kù)侖法進(jìn)行測(cè)定。卡氏加熱爐的建議設(shè)置參數(shù),溫度：130 °C，設(shè)定時(shí)間：300秒。卡式爐法適用于溶解性較差、成分復(fù)雜、存在副反應(yīng)、水分釋放緩慢和吸濕性較強(qiáng)的待測(cè)樣品水分測(cè)試。

對(duì)于含醛酮結(jié)構(gòu)的待測(cè)樣品，如：含有甲醛、乙醛、苯甲醛等醛類，以及含有丙酮、丁酮、環(huán)己酮等酮類的樣品，建議采用有隔膜電極滴定池的水分測(cè)定儀，需選擇醛酮樣品的專用試劑：陽(yáng)極液（貨號(hào)：1.88062.0500）和陰極液（貨號(hào)：1.88063.0010）。

一、卡爾費(fèi)休容量法（單組分試劑）

2.儀器方法設(shè)置建議等

待測(cè)樣品外部萃取和攪拌時(shí)間：120 秒

儀器參數(shù)設(shè)置：

極化電流 I(pol) = 20-50 µA，終點(diǎn)控制電位 U(EP) = 100-250 mV

滴定終止標(biāo)準(zhǔn)：漂移值 < 20 µL/min

建議取樣量：0.1-1.0 g

3.操作步驟簡(jiǎn)介

為使樣品充分溶解和水分全部萃取，建議待測(cè)樣品外部萃取時(shí)間至少120 秒。首先將50mL滴定介質(zhì)溶劑加入滴定池，用滴定劑預(yù)滴定至系統(tǒng)干燥。然后直接將待測(cè)樣品倒入滴定杯中（通過稱量西林瓶加樣前后的質(zhì)量確定準(zhǔn)確的取樣量）。啟動(dòng)滴定程序開始容量法滴定，儀器上直接讀取待測(cè)樣品的水分含量值。

二、       卡爾費(fèi)休容量法（雙組分試劑）

2.儀器方法設(shè)置建議等

待測(cè)樣品外部萃取和攪拌時(shí)間：120 秒

儀器參數(shù)設(shè)置：

極化電流 I(pol) = 20-50 µA，終點(diǎn)控制電位 U(EP) = 100-250 mV

滴定終止標(biāo)準(zhǔn)：漂移值 < 20 µL/min

建議取樣量：0.1-1.0 g

3.操作步驟簡(jiǎn)介

為使樣品充分溶解和水分全部萃取，建議待測(cè)樣品外部萃取時(shí)間至少120 秒。首先將50mL滴定介質(zhì)溶劑加入滴定池，用滴定劑預(yù)滴定至系統(tǒng)干燥。然后直接將待測(cè)樣品倒入滴定杯中（通過稱量西林瓶加樣前后的質(zhì)量確定準(zhǔn)確的取樣量）。啟動(dòng)滴定程序開始容量法滴定，儀器上直接讀取待測(cè)樣品的水分含量值。

三、卡爾費(fèi)休庫(kù)侖法

（有隔膜電極滴定池）

1.所需試劑（Aquastar®庫(kù)侖法滴定劑，降本增效：只需用1瓶試劑，無需區(qū)分陰極液和陽(yáng)極液）

2.儀器方法設(shè)置建議等

滴定儀參數(shù)設(shè)置建議，用于終點(diǎn)指示，例如：

極化電流I(pol) = 5-10 μA

終點(diǎn)控制電位U(EP) = 50-100 mV

滴定終止標(biāo)準(zhǔn):  漂移值< 20 μg/min
建議取樣量：1 支（例如：西林瓶包裝）

3.操作步驟簡(jiǎn)介

將卡爾費(fèi)休試劑分別加入有隔膜滴定池的陰極室和陽(yáng)極室，啟動(dòng)庫(kù)侖法滴定儀，將溶劑預(yù)滴定至干燥。完成預(yù)滴定并待漂移值穩(wěn)定后，用注射器從陽(yáng)極室抽取已滴定溶液并重新注入池中，重復(fù)此操作數(shù)次以干燥注射器。當(dāng)將潤(rùn)洗液注入庫(kù)侖滴定池后漂移值不再升高時(shí)，再次從陽(yáng)極室抽取已滴定溶液，通過隔墊注入待測(cè)樣品中（樣品質(zhì)量為： M，加溶劑后總質(zhì)量為： M+M1）。通過振蕩（或超聲水浴）溶解樣品，再用同一注射器抽取萃取液，注入滴定池（通過注射器注入前后稱重確定準(zhǔn)確的取樣量），啟動(dòng)滴定程序開始進(jìn)行庫(kù)侖法測(cè)定，測(cè)定結(jié)果對(duì)應(yīng)該部分樣品的水分含量（A）。

待測(cè)樣品中水分濃度的計(jì)算公式：水分（%）= A（%）×（M + M1）/ M

四、卡爾費(fèi)休庫(kù)侖法（無隔膜電極滴定池）——1.所需試劑 (Aquastar®庫(kù)侖法滴定劑，降本增效，一站式采購(gòu))

備注：如上卡爾費(fèi)休試劑可根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)室條件二選一即可。

2.儀器方法設(shè)置建議等

滴定儀參數(shù)設(shè)置建議，用于終點(diǎn)指示，例如：

極化電流I(pol) = 5-10 μA

終點(diǎn)控制電位U(EP) = 50-100 mV

滴定終止標(biāo)準(zhǔn):  漂移值< 20 μg/min
建議取樣量：1 支（例如：西林瓶包裝）

3.操作步驟簡(jiǎn)介

將卡爾費(fèi)休試劑分別加入滴定池中，啟動(dòng)庫(kù)侖法滴定儀，將溶劑預(yù)滴定至干燥。完成預(yù)滴定并待漂移值穩(wěn)定后，用注射器從陽(yáng)極室抽取已滴定溶液并重新注入池中，重復(fù)此操作數(shù)次以干燥注射器。當(dāng)將潤(rùn)洗液注入庫(kù)侖滴定池后漂移值不再升高時(shí)，再次從陽(yáng)極室抽取已滴定溶液，通過隔墊注入待測(cè)樣品中（樣品質(zhì)量為： M，加溶劑后總質(zhì)量為： M+M1）。通過振蕩（或超聲水浴）溶解樣品，再用同一注射器抽取萃取液，注入滴定池（通過注射器注入前后稱重確定準(zhǔn)確的取樣量），啟動(dòng)滴定程序開始進(jìn)行庫(kù)侖法測(cè)定，測(cè)定結(jié)果對(duì)應(yīng)該部分樣品的水分含量（A）。

待測(cè)樣品中水分濃度的計(jì)算公式：水分（%）= A（%）×（M + M1）/ M

五、其他常用產(chǎn)品推薦

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