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基因治療作為一種新興療法，是向靶細胞引入正常有功能的基因，以糾正或補償致病基因所產生的缺陷，從而達到治療疾病的目的。目前大多數基因治療應用的仍是病毒載體，這些病毒載體經過改造后，已經不具有致病性。廣泛應用的病毒載體包括腺病毒載體（ADV）、慢病毒載體（LV）、單純皰疹病毒載體（HSV）、痘病毒載體（PV）及腺相關病毒載體（AAV）。作為遞送基因療法的有力工具，AAV是目前在研基因療法項目中應用最為廣泛的病毒載體。以AAV載體為代表的基因治療藥物能修正遺傳病患者的基因缺陷，給一些遺傳性罕見病、神經系統退化性疾病患者帶來了希望。
AAV的衣殼蛋白以二十面體的構型聚集在一起，在結構上形成刺狀突起，這些突起介導與靶向細胞表面蛋白質的相互作用，賦予了不同類型的AAV特異性地靶向不同組織地能力。AAV2是20世紀60年代從腺病毒中發現的AAV載體。迄今為止，已經發現了13種原發性AAV血清型和100多種不同的變異體。每種血清型都具有細胞靶向性，可以靶向不同的細胞組織。
表1.不同AAV血清型以及它們相互作用的受體類型和組織趨向性
AAV血清 | 原代受體 | 共受體 | 組織特異性 |
AAV2 | 肝素 | AAV受體、FGFR、LamR、整合素 | 中樞神經系統、視網膜、肝臟 |
AAV5 | 唾液酸 | AAV受體、PDGFR | 中樞神經系統、眼睛、肺 |
AAV6 | 唾液酸、肝素 | AAV受體、EGFR | 中樞神經系統、肌肉、肺、心臟 |
AAV8 | 未知 | AAV受體、LamR、 | 中樞神經系統、肝臟、心臟、眼睛 |
AAV9 | 半乳糖 | AAV受體、LamR、 | 中樞神經系統、肝臟、心臟、肌肉 |
根據AAV滴度測定不同原理，可以將其分為物理滴度測定和生物學滴度測定兩大類，生物學滴度包括感染滴度和轉導滴度。物理滴度，一般是指基因組滴度或者病毒顆粒滴度(衣殼滴度)。顆粒滴度主要是通過紫外吸光法、ELISA、HPLC等方法來測定，每種方法都有各自的優缺點，其中ELISA因其重現性高、特異性好等特點而得到了廣泛的應用，這也是監管部門所建議的滴度測定方法之一。
產品應用
翌圣生物推出腺相關病毒定量檢測試劑盒，可應用于基因治療、細胞免疫治療、干細胞治療、生物大分子藥物治療等領域的研究，又可應用于基因工程研究等基礎科研領域，還可以為基因治療、細胞免疫治療的CRO和CDMO企業進行產能賦能。
檢測原理
以99302ES-AAV2 Titration ELISA Kit為例
99302ES是一種體外酶聯免疫吸附測定試劑盒，用于定量測定樣本中的AAV2衣殼含量。特異性抗AAV2單克隆抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本，經過孵育，樣本中存在的AAV2衣殼與固相抗體結合。洗滌去除未結合的物質后，加入檢測抗體孵育結合，經洗滌，再加入酶結合物(Streptavidin-HRP)孵育結合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中AAV2衣殼的濃度成正比。加入終止液終止反應，在450 nm 波長測定吸光度值。
產品優勢
準確度高
靈敏度好
精密度高
重復性好
線性范圍寬
特異性高
產品數據展示
標準曲線
質控數據
Test Method | Acceptance Criteria | Test Result |
Precision | 3.30E+09capsids/ml（OD450nm） CV（n=10）<10% | 5.6% |
8.25E+08capsids/ml（OD450nm） CV（n=10）<10% | 5.7% | |
2.06E+08capsids/ml（OD450nm） CV（n=10）<10% | 5.0% | |
Accuracy | Recovery：70%-130% | 80.9% |
Specificity | Different serotypes of AAV was added to the solvent, murine serum, rabbit serum, sheep serum, and E. coli cell supernatant. There are no cross-reaction between the kit and other serotypes of AAV. | Conforms |
Linearity | R2≥99.0% | 99.7% |
產品推薦
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
AAV2 Titration ELISA Kit | 96T | 99302ES |
AAV5 Titration ELISA Kit | 96T | 99303ES |
AAV6 Titration ELISA Kit | 96T | 99304ES |
AAV8 Titration ELISA Kit | 96T | 99305ES |
AAV9 Titration ELISA Kit | 96T | 99306ES |
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