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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 40301ES50 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit 細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒 | 40301ES50 | 50 T | 298.00 |
40301ES60 | 100 T | 528.00 |
產品描述
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒（Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit）采用了經典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即PI staining)方法對細胞周期與細胞凋亡進行分析。
碘化丙啶 (Propidium，PI) 是一種雙鏈DNA熒光染料，其嵌入雙鏈DNA后可以產生熒光，并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內的DNA被PI染色后，可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定，根據DNA含量的分布情況，進行細胞周期和細胞凋亡分析。
PI染色后，假設G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。凋亡細胞由于細胞核發生濃縮以及發生DNA段化 (DNA fragmentation) 導致部分基因組DNA斷在染色過程中丟失，因此凋亡細胞PI染色后呈現明顯的弱染，即熒光強度小于1，在流式檢測的熒光圖上出現所謂的sub-G1峰，即凋亡細胞峰。
細胞凋亡也可以用流式細胞儀觀察細胞光散射的變化來檢測。 細胞發生凋亡時，由于胞漿和染色質濃縮、核碎裂，產生凋亡小體，使細胞的光散射性質發生變化。凋亡前期，染色質皺縮，細胞密度增加，前向角光散射色顯著降低。凋亡后期，細胞產生凋亡小體，前向角光散射和側向角光散色都顯著降低。
本試劑盒通常應用于貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細胞狀態，才可以進行檢測。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | |
40301ES50（50T） | 40301ES60(100T) | ||
40301-A | RNase A Solution | 0.5mL | 1mL |
40301-B | PI Solution | 0.5mL | 1mL |
40301-C | Staining Solution | 25mL | 50mL |
運輸與保存方法
運輸：冰袋（wet ice）運輸。
保存方法：-20℃避光保存，有效期為2年。
【注】如果需要在短時間內多次重復使用，可以于4℃避光保存，2個月內有效。
注意事項
1）本試劑盒需要使用流式細胞儀進行檢測。
2）細胞處理需輕柔，盡量避免人為的損傷細胞。
3）為防止不同批次細胞在實驗時所處周期不同導致重復性差，可以在實驗前進行細胞的同步化處理。實驗細胞應處于對數
生長期，貼壁細胞一般在50～80%匯合度時收集為宜。
4）400目篩網過濾是用來將粘在一起的細胞團濾掉，留下單細胞，否則會出現人為的多倍體干擾。如果沒有條件過濾，請在染色之前將細胞輕彈以分散，再進行染色。
5）熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
6）操作碘化丙啶時，應注意防護，保護眼睛、避免吸入。
7）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
8）本產品僅作科研用途!
使用方法
1）細胞樣品制備：細胞數量控制在1×105~1 × 106個。
a）貼壁細胞：小心吸除細胞培養液，用胰|酶消化細胞，制備成單細胞懸液。1000 g離心5 min，沉淀細胞，棄上清，用1 mL預冷的PBS潤洗細胞一次，離心收集細胞。
b）懸浮細胞：1000 g離心5 min，沉淀細胞，小心吸除上清。加入1 mL預冷的PBS，重懸細胞，再次離心收集細胞。
c）組織細胞：將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后，用0.25%的胰|酶消化0.5-1 h，經過200-400目篩網過濾得到單細胞懸液。1000 g離心5 min，沉淀細胞。加入約1 mL預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。如組織難以消化，可加入適量膠原酶。
2）細胞固定：細胞沉淀用1 mL預冷的70%乙醇輕輕混勻，4℃固定2 h以上或者過夜。接下來1000 g，離心5 min沉淀細胞后，用1 mL預冷的PBS重懸。然后再次1000 g離心5 min沉淀細胞。
3）染色：在0.5 mL染色緩沖液(40301-C)中加入10 μL 碘化丙啶儲液（40301-B）和10 μLRNase A（40301-A）溶液，混勻待用。每個細胞樣品加入0.5 mL配置好的碘化丙啶染色 液，輕輕混勻重懸細胞。37℃避光孵育30min，就可以進行流式檢測，流式檢測最好在5h內完成。
【注】：配置好的PI染色液在短時間內可以4℃保存，宜當日使用。
4）流式檢測和分析：細胞用400目篩網過濾，用流式細胞儀進行檢測，在激發波長488 nm波長處檢測，同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析
HB210526
