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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 40104ES |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品詳情
產品介紹
Dispase II，中文名分散酶II，一種非特異性金屬蛋白酶，細胞生物學中常用于從不同的組織或器官分離單細胞，并用于后續細胞培養，如原代細胞的分離，細胞傳代等。另外，Dispase II還可用于消除懸浮細胞培養過程中發生的細胞聚集。與其他細胞生物學常用蛋白酶（如胰蛋白mei、膠原酶、鏈霉蛋白mei等）相比，該酶具有以下優勢：1）一種快速有效且溫和的細胞消化酶，對細胞損傷小，且能維持細胞膜完整性；2）來源于細菌，無支原體或其他動物病毒污染；3）穩定性強，不受溫度、pH及血清組分的影響；4）可用于多種類型組織和細胞的分離等。
本品非無菌Dispase II，來源于Bacillus polymyxa，使用時需對其除菌處理，用于細胞培養時常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。
產品特色
產品信息
| 貨號 | 40104ES60 / 40104ES80 |
| 規格 | 100 mg / 1 g |
| 比活性（Specific Activity） | ≥0.8 U/mg (+37℃, casein as substrate, pH 7.5) |
| 單位定義（Unit Definition） | 在溫度37℃、pH值為7.5的條件下，每分鐘水解酪蛋白釋放出相當于1 µM(181 µg)酪氨suan的福林陽性氨基酸和肽所需要的酶量，即為一個蛋白酶活性單位，以U表示。 |
| 最佳pH（pH Optimum） | 6.0-8.5 |
| 抑制劑（Inhibitors） | EDTA, EGTA, Hg2+, 其他金屬離子。血清不會抑制dispase活性。 |
| 激活劑（Activator） | Ca2+，Mg2+，Mn2+，Fe2+，Fe3+，Al3+。最佳的Ca2+濃度為2 mM。本酶制品已含足量的Ca2+使其處于最佳活性。 |
應用案例
使用說明
1 母液及工作液配制
1）用50 mM HEPES-KOH緩沖液(pH 7.4, 150 mM NaCl)（60165ES）溶解適量本品凍干粉，配制成10 mg/mL的儲存液，用0.22 µM濾膜過濾除菌。
2）使用時用適當細胞培養液將上述儲存液稀釋到工作液濃度即可，用于細胞分離時其常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。
【注】不推薦使用高于2.4 U/mL的工作濃度。
2 組織的解離
1）用無菌的小刀或者剪刀將組織jian成合適大小的組織塊；
2）用無菌PBS清洗組織塊；
3）向上述組織塊中加入Dispase II溶液（工作濃度為0.6-2.4 U/mL），并確保組織塊全部浸沒于Dispase 溶液中。
4）37℃孵育，孵育過程緩慢攪拌直至組織塊全部解離。【注】若第一次使用該酶，可通過細胞計數來確定需要的總孵育時間。一般對于較難解離組織，1h即可達到分離目的，但更長時間（如數小時）的孵育也不會明顯影響細胞活性。
5）如有需要，可將上述消化產物通過無菌不銹鋼網篩過濾，以分開單細胞與殘留的組織塊。或者待大塊組織沉淀后輕輕倒出上層細胞，若是需要，換用新鮮dispase溶液以進一步解離殘留組織。
6）離心沉淀細胞，倒掉酶溶液；
7）用培養基重懸細胞沉淀，并于常規條件下培養細胞。
3 細胞傳代
1）利用Dispase 溶液（37℃預熱）浸沒細胞，于37℃孵育5 min；
2）吸除上述溶液，繼續于37℃孵育10 min；
3）顯微鏡下觀察細胞分離情況，如需要，可進一步孵育15 min；
4）利用細胞培養基懸浮細胞，輕輕旋轉使得細胞沉淀并用培養基清洗細胞；
5）換用新鮮細胞培養液重懸細胞，并按常規方法進行細胞鋪板。
儲存條件
凍干粉4℃保存，保質期2年。儲存液于4℃可穩定保存2周，若長期保存，請分裝后于-20℃凍存。避免反復凍融。
FAQ
Q: 分散酶II用Hepe緩沖鹽溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl), 括號中是什么意思？可以用其他緩沖液替代嗎？
A: 括號內，是Hepes緩沖液的組成。建議用推薦的HEPES緩沖液溶解。其他緩沖液沒有驗證數據。
