從2小時到4周——索萊寶脫鈣液全系列速度譜系
在組織病理學與科研實驗中,骨組織、牙齒及鈣化病灶的制片始終是一個技術難點。含鈣組織因鈣鹽與石蠟密度差異顯著,無法直接用石蠟包埋切片。脫鈣,作為骨組織制片中最為關鍵的組織處理步驟,直接決定了切片質量與后續染色效果。北京索萊寶科技有限公司(Solarbio)深耕生命科學試劑領域二十余年,目前已推出12種脫鈣液和2種脫鈣輔助試劑,覆蓋骨松質、骨密質、牙齒等各類含骨組織的脫鈣需求,適用于病理染色、免疫組化、原位雜交等多種標記觀察方法。
一、脫鈣液的核心作用與原理
脫鈣液的核心功能是去除組織中的鈣鹽、軟化硬組織,為后續切片與實驗分析提供基礎。其作用機理主要分為兩類:
螯合作用:EDTA(乙二胺四乙酸)通過與鈣離子形成穩定的螯合物,將鈣鹽從組織中逐步“抽離”。這種方式極為溫和,對組織結構影響最小,能較好地保存組織的酶類和抗原活性,經EDTA脫鈣后的組織可進行免疫組化和原位雜交染色。
酸解作用:有機酸(甲酸、檸檬酸等)和無機酸(鹽酸等)通過酸性溶解方式快速去除羥基磷灰石等鈣鹽。酸類脫鈣液速度遠快于EDTA,但對組織結構的保護性相對較弱。
二、索萊寶脫鈣液產品線全景
索萊寶脫鈣液產品體系可劃分為四大類別:快速酸類脫鈣液、溫和螯合類脫鈣液、復合酸類脫鈣液、電解法脫鈣液。
(一)快速酸類脫鈣液——JYBL系列
1.JYBL-Ⅰ脫鈣液(貨號:G2470)
JYBL-Ⅰ脫鈣液主要由稀酸、甲醛、甲酸等組成。其突出優勢在于作用迅速,24~36小時即可完成脫鈣,同時對組織結構損害較小、脫鈣。該產品特別適用于日常病理科骨組織標本的脫鈣。需要注意的是,不宜用化學方法確定脫鈣終點。
2.JYBL-Ⅱ脫鈣液(貨號:G2471)
作為JYBL-Ⅰ的升級版,JYBL-Ⅱ脫鈣液作用更為迅速,一般24小時即可完成脫鈣,比JYBL-Ⅰ時間更短。同樣適用于日常病理科骨組織標本脫鈣,但不宜用化學方法確定脫鈣終點,對組織結構有一定損傷。
3.JYBL-Ⅲ脫鈣液(貨號:G2472)
JYBL-Ⅲ脫鈣液主要由甲醛、高濃度甲酸等組成。甲酸被譽為“接近無機酸和有機酸臨界線的一種有機酸”,對組織結構損害小,脫鈣。該產品適用于病理科特殊骨組織標本脫鈣,脫鈣前對組織進行固定效果更佳。
4.JYBL-Ⅳ脫鈣液(貨號:G2473)
JYBL-Ⅳ脫鈣液主要由甲醛、甲酸等組成,不含強酸,特別適用于骨組織快速脫鈣。其最大亮點在于可升溫至37℃快速脫鈣,常規大小的骨片僅需2~3小時即可完成。同時兼具對組織結構損害小、脫鈣優勢。
(二)溫和螯合類脫鈣液——EDTA系列
5.EDTA脫鈣液(pH7.2)(貨號:E1171)
這是索萊寶經典的螯合型脫鈣液,pH值約為7.2。其優點顯著:經EDTA脫鈣的組織染色結果好,對組織結構損害小,可用化學方法準確確定脫鈣終點。缺點是脫鈣速度很慢,一般需要數周至數月;脫鈣后組織會稍微變硬。
6.EDTA脫鈣液(酶保護型)(貨號:G2521)
在常規EDTA脫鈣液基礎上添加了酶保護劑,pH值約為7.2-7.4。其優勢更為突出:經EDTA脫鈣的組織染色結果更好;對組織結構損害比常規EDTA脫鈣液更小;可顯著減少脫鈣骨組織中ALP(堿性磷酸酶)酶活性的丟失。尤其適用于需要保留酶活性的科研場景。
7.福爾馬林-EDTA脫鈣液(貨號:G2520)
該產品主要由EDTA、福爾馬林等組成,pH值約為7.2~7.4。福爾馬林的加入使得脫鈣與固定同步進行,相對于常規EDTA脫鈣液,對組織結構損害更小,但脫鈣速度更為緩慢。
(三)復合酸類脫鈣液
8.VonEbener脫鈣液(貨號:G2500)
VonEbener脫鈣液主要由氯化鈉、鹽酸等組成。其優點在于細胞核染色結果好,且無需水洗,操作極為便捷。缺點是不宜用化學方法確定脫鈣終點。
9.Plank-Rychlo脫鈣液(貨號:G2474)
Plank-Rychlo脫鈣液是一種復合酸類脫鈣液,性質較溫和,脫鈣效果較好。相比單一酸類脫鈣液,它對組織的損傷要小很多;相比螯合脫鈣液,速度又快很多。額外添加的輔助試劑可在快速充分脫鈣的同時防止纖維組織過度膨脹,減少組織破壞對染色的影響。
10.檸檬酸鹽脫鈣液(貨號:G2700)
檸檬酸鹽脫鈣液是緩沖脫鈣液,屬于緩慢脫鈣液,主要由檸檬酸、檸檬酸鹽、硫酸鋅等組成。其優點在于經該液脫鈣的組織染色結果好,對組織結構損害小。缺點是脫鈣速度很慢,不適合常規標本脫鈣使用,且脫鈣后組織會稍微變硬。
11.AFIP甲酸-檸檬酸脫鈣液(貨號:G2480)
該產品由甲酸溶液和檸檬酸鈉溶液組成,臨用前等量混合。AFIP配方是病理學領域的經典脫鈣方案,兼具甲酸的脫鈣效率與檸檬酸鹽的緩沖保護作用。
12.甲酸脫鈣液(貨號:G2490)
甲酸脫鈣液主要由甲酸、福爾馬林等組成。其優點在于對細胞核染色結果較好,兼具脫鈣和組織固定的雙重作用,適用于小塊組織和牙齒的脫鈣。缺點是脫鈣速度較慢,不適合常規標本和密皮質骨脫鈣使用,脫鈣后需用堿溶液進行中和處理。
13.混合甲酸鹽酸脫鈣液(1:1:8)(貨號:G2695)
這是一種慢性脫鈣液,對組織損傷較小,但脫鈣時間較長。
(四)電解法脫鈣液
14.電解脫鈣液(甲酸法)(貨號:G2672)
電解脫鈣液主要由10%甲酸溶液和8%鹽酸水溶液組成。其脫鈣速度極快——直流6V電壓下,厚度約5mm的組織可在10~180分鐘內脫鈣完畢。適用于骨松質、骨密質和牙齒等大多數組織的脫鈣。但需注意:電解脫鈣對組織精細結構有一定損害,不適用于電鏡和免疫組化含骨樣本制備;脫鈣后需搭配脫鈣后堿處理液進行中和處理。
三、脫鈣輔助試劑
1.脫鈣終點檢測試劑盒(化學法)(貨號:G2880)
脫鈣程度的精準控制至關重要——脫鈣不足會導致切片困難,脫鈣過度則會增加組織損傷。該試劑盒通過化學方法檢測脫鈣終點,幫助實驗人員精準把握脫鈣進程。
2.脫鈣后堿處理液(貨號:G3430)
組織脫鈣后,需立即將組織中的酸中和掉,使組織迅速脫酸和中性化,以保證切片質量和染色效果。脫鈣后堿處理液主要由硫酸na、硫酸鋰等組成,建議過夜處理。
四、操作要點與注意事項
取材:骨組織脫鈣時,取材不宜過厚,一般約5mm。
固定與清洗:組織固定后,用PBS清洗3次,每次20分鐘;再用蒸餾水清洗3次,每次20分鐘。
脫鈣:將組織放入20~30倍體積的脫鈣液中。EDTA脫鈣液建議置于2~8℃環境中,每天更換一次脫鈣液——骨松質約需2周,骨密質約需4周。酸類脫鈣液通常在室溫下進行。
終點判斷:可采用物理法(針刺無阻力感)或化學法(檢測試劑盒)判斷脫鈣終點。
安全提示:本產品僅供科研使用,操作時請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩。
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