一．產品簡介

1、產品名稱：小鼠視網膜色素上皮細胞       

2、組織來源：眼組織

3、產品規格：25cm²培養瓶/5×10⁵cells

4、細胞簡介：

小鼠視網膜色素上皮細胞分離自眼組織；視網膜色素上皮為一層矮六角棱柱狀細胞，高8～10μm，寬12～18μm。細胞頂部伸出許多長5～7μm的突起。在胚胎發生時，上皮基部和脈絡膜緊密連接，但頂部與視細胞連接不緊，故易在此發生視網膜剝離。電鏡觀察，細胞之間有緊密連接、中間連接和縫隙連接，基底部有胞膜內褶和線粒體，故推測色素上皮有運輸離子和屏障作用。胞核圓形，位于細胞基部。頂部胞質含許多橢圓或圓形的黑色素顆粒和含板層碎片的殘余體。滑面內質網發達，分布于色素顆粒和殘余體之間。有高爾基復合體、溶酶體、粗面內質網和脂滴。這些結構反映了色素上皮的多種功能：①色素顆粒由粗面內質網產生，經高爾基復合體轉運至胞質頂部。已知兩棲類和魚類受強光照射時，色素顆粒移入突起中；處于黑暗時，色素顆粒又回到胞質中，這說明色素上皮有吸收光和保護視細胞免受強光刺激的作用；②脂滴有集聚和貯存維生素A的作用，通過滑面內質網的酯化與轉運，參與視細胞合成視紫紅質；③能吞噬脫落的視桿細胞外節膜盤，藉溶酶體酶水解消化，形成殘余體；④分泌蛋白多糖，粘合和維持視桿、視錐與色素上皮的相互位置關系，從而保證視紫紅質的更新和營養物質的傳遞。

本公司生產的小鼠視網膜色素上皮細胞采用酶液消化法制備而來，細胞總量約為5×10⁵cells，細胞經CK18免疫熒光鑒定；細胞純度可達85%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 

5、培養基信息：

培養基內容：基礎培養基、FBS、Penicillin、Streptomycin等；

為保證細胞體外培養最佳狀態我們推薦使用小鼠視網膜色素上皮細胞專用培養基作為體外培養小鼠視網膜色素上皮細胞專用培養基。

二．細胞發貨及鑒定圖片

（1）細胞狀態照片：細胞發貨時發送至少3張細胞發貨前白光電子照片；

（2）細胞鑒定照片：提供一套細胞鑒定圖片（可用于發文章）；若要用于文章多套使用，需額外增加鑒定費用，提供3套鑒定圖片；       

三．使用方法

在技術部標準操作流程下，小鼠視網膜色素上皮細胞可傳1-2代左右；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

一、客戶收到細胞操作如下

1. 取出25cm²培養瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態；

2. 觀察細胞生長情況，細胞密度低于80%時，貼壁細胞倒去瓶中培養液，留下8ml作用繼續培養；細胞密度大于80%時，即可進行傳代；

3. 吸出25cm²培養瓶中的培養基，用PBS洗滌3次；

4. 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，37℃溫浴2-3min左右；倒置顯微鏡下觀察細胞回縮變圓，透亮時即可終止消化，加入雙倍充分培養液輕輕吹打細胞使其變成單細胞懸液；

5. 收集細胞懸液至離心管內，1000rpm離心5min，觀察細胞沉淀；

6. 加入1ml的充分培養液，輕輕吹打成單細胞懸液，均勻分配至細胞培養瓶中，初次傳代建議按照1：2比例進行。

7. 待細胞充分貼壁后，培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的充分培養基。

二、細胞凍存管復蘇

1. 提前室溫預熱培養基，將水浴鍋調至37℃；

2. 在超凈工作臺內提前準備好15ml離心管，并加入5ml的充分培養基；

3. 將凍存管快速放入水浴鍋中，不斷晃動凍存管，直至管內冰塊全部融化

4. 然后快速取出，噴灑酒精，轉移至超凈工作臺；

5. 擰開凍存管螺紋蓋，用移液槍將細胞懸液輕輕吸出，轉移至含5ml充分培養基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

6. 離心結束后，觀察有無細胞沉淀，將上清棄去，加入1ml新鮮的充分培養基，用移液槍輕輕吹打成細胞懸液；將細胞懸液轉移至T25培養瓶中，T25培養瓶建議培養基加入量5-7ml，輕輕晃動培養瓶使細胞分散均勻，置于培養箱中培養。

三、細胞凍存

1. 凍存條件：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO或者無血清凍存液

2. 保存條件：液氮存儲

四、注意事項

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月；