注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

    方法：可見分光光度法

    規(guī)格: 50T/48S

    產(chǎn)品內容：

提取液：60%乙醇，自備，常溫保存。

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 30mL×1 瓶，4℃保存。

標準品：液體 1mL×1 支，4℃保存。10mg/mL 單寧酸標準溶液。

 產(chǎn)品說明：

類黃酮是一類多苯化合物，屬于植物次生代謝物，對人體具有消炎，抗菌，降血脂，清除體內羥自由基，預防癌癥等作用。

在堿性亞硝酸鹽溶液中，類黃酮與鋁離子形成在 470nm 處有特征吸收峰的紅色絡合物，測定樣品提取液在 470nm 處的吸光值，即可計算樣品類黃酮含量。

 自備實驗用品及儀器：

天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機、可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿、蒸餾水。

操作步驟：

   一、類黃酮提取

將樣本烘干至恒重，粉碎，過 40 目篩之后，稱取約 0.1g，加入 1mL 提取液，用超聲提取法進行提取，超聲功率 300W，破碎 5s，間歇 8s，60℃，提取 30min。12000rpm，25℃，離心 10min， 取上清，用提取液定容至 1mL，待測。

二、標準溶液準備

將 10mg/mL 單寧酸標準溶液進行二倍稀釋至 1.25、0.625、0.3125、0.156、0.078、0.039、0.02、0.01、0.005mg/mL 備用。

三、測定操作表

1、可見分光光度計預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 470nm，蒸餾水調零。

2、操作表

 四、類黃酮含量計算

1、標準曲線繪制

以單寧酸濃度為橫坐標，ΔAˊ為縱坐標繪制標準曲線 y=kx+b，將ΔA 帶入方程求得 x； 2、按樣本鮮重計算

類黃酮含量（mg/g 鮮重）= x×V 提取÷W=x÷W 3、按樣本蛋白濃度計算

類黃酮含量（mg/mg prot）= x×V 提取÷(Cpr×V 提取) = x÷Cpr

V 提取：加入提取液體積；1mL；W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL。

 注意事項：

1、 OD 值大于 0.5，樣品適當稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。

2、顯色完成后立即測定，2 小時后吸光值會下降