分光光度法50管/48樣

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

類胡蘿卜素是一種脂溶性且具有營養特性的化合物，給植物和動物提供天然色素，是重要的抗氧化劑，并有能力轉換為必需維生素。類胡蘿卜素可預防細胞，組織和基因損毀，增強身體免疫系統，抵御感染，減少癌癥風險，保護心臟。

測定原理

樣品通過混合有機溶劑萃取，類胡蘿卜素與非類胡蘿卜素成分分離，在448nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、烘箱，100目篩、三角瓶或燒杯、漏斗，紗布、玻璃試管、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、正己烷

試劑組成和配制

試劑一：液體100mL×3瓶，4℃保存。

試劑二：液體100mL×1瓶。4℃保存。

試劑三：液體80mL×1瓶。4℃保存。

試劑四：自備。（正己烷）

樣本處理

提取：稱取0.5g樣本，加入1.5mL試劑一 ，冰浴勻漿，超聲破萃取15min(可改用振蕩金屬浴），15000g 25℃離心5min，取上層液轉入10mL離心管中，沉淀用1.5mL試劑一重復提取2次，并將上層液并入上述10mL離心管中作為提取出的非皂化類胡蘿卜素樣品。

皂化：向上述非皂化類胡蘿卜素樣品中加入2mL試劑二，混勻，25℃室溫避光皂化過夜，皂化完成后，加入3mL試劑三，混勻后，5000g 25℃離心5min，將上層類胡蘿卜素提取相轉入5mL離心管，用正己烷定容到5mL，置冰上待測。

測定操作表

注意：空白管只需測定一次。

計算公式

類胡蘿卜素含量（μg/g鮮重）= △A×V樣總÷（ε×d）÷W

 = 31.25×△A÷W

V樣總：提取液總體積，5mL；ε：類胡蘿卜素消光系數，0.16；d：比色皿光徑，1cm； W：樣本質量，g

注意事項

1. 提取液易揮發，有毒性，操作時做好防護措施。

2. 測定必須能迅速，防止揮發造成誤差。