活細(xì)胞動態(tài)成像儀是一類可在維持細(xì)胞正常生理活性的前提下,對活體細(xì)胞進(jìn)行長時間、多維度動態(tài)觀測分析的科研儀器,廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、藥物研發(fā)、干細(xì)胞研究等領(lǐng)域。
活細(xì)胞動態(tài)成像儀融合光學(xué)顯微技術(shù)、精密環(huán)境控制技術(shù)、自動對焦掃描技術(shù)與智能圖像分析技術(shù),核心原理是在維持細(xì)胞生理活性的前提下,通過低損傷光學(xué)成像采集細(xì)胞實(shí)時狀態(tài),搭配自動化控制系統(tǒng)完成連續(xù)動態(tài)監(jiān)測與數(shù)據(jù)量化分析,整體可分為四大核心系統(tǒng)協(xié)同運(yùn)作。
(一)精密環(huán)境控制系統(tǒng):維持細(xì)胞活性基礎(chǔ)
活細(xì)胞觀測的核心前提是保證細(xì)胞在觀測全過程中保持正常生理狀態(tài),避免環(huán)境波動導(dǎo)致細(xì)胞凋亡、狀態(tài)異常,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。設(shè)備搭載的一體化環(huán)境控制系統(tǒng),可精準(zhǔn)模擬細(xì)胞體外培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)生理環(huán)境,常規(guī)參數(shù)為溫度37℃、二氧化碳濃度5%、相對濕度95%以上。系統(tǒng)通過高精度傳感器實(shí)時監(jiān)測艙內(nèi)環(huán)境數(shù)據(jù),一旦溫度、氣體濃度、濕度出現(xiàn)偏差,自動啟動調(diào)節(jié)模塊,快速修正參數(shù),消除環(huán)境波動干擾。同時,密閉式培養(yǎng)艙設(shè)計可隔絕外界雜菌污染與氣流干擾,為長時間動態(tài)成像提供穩(wěn)定、無菌的微環(huán)境,適配數(shù)小時至數(shù)天的連續(xù)觀測實(shí)驗(yàn)。
(二)低損傷光學(xué)成像系統(tǒng):實(shí)現(xiàn)無干擾成像采集
光學(xué)成像系統(tǒng)是設(shè)備的核心成像單元,兼顧成像清晰度與細(xì)胞保護(hù)性,解決傳統(tǒng)顯微鏡強(qiáng)光損傷活細(xì)胞的痛點(diǎn)。設(shè)備采用寬場單色LED熒光光源與明場光源組合,光源光譜精準(zhǔn)、光強(qiáng)均勻,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求切換明場、熒光雙通道成像模式,適配普通細(xì)胞觀測與熒光標(biāo)記細(xì)胞追蹤實(shí)驗(yàn)。相較于傳統(tǒng)汞燈光源,LED光源發(fā)光穩(wěn)定、發(fā)熱量低、光毒性極小,可有效避免強(qiáng)光照射導(dǎo)致的細(xì)胞氧化損傷、活性下降問題。
成像光路依托高精度物鏡、光學(xué)鏡片完成光線傳輸與放大,通過光的折射與衍射原理,對細(xì)胞樣本進(jìn)行多級放大成像,物鏡數(shù)值孔徑與放大倍數(shù)直接決定成像分辨率與視野范圍。激發(fā)光源發(fā)出的光線穿透細(xì)胞樣本后,攜帶細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)、熒光信號的光學(xué)信息,傳輸至圖像采集組件,完成基礎(chǔ)成像采集。
(三)自動對焦與掃描系統(tǒng):保障連續(xù)成像穩(wěn)定性
長時間活細(xì)胞觀測過程中,培養(yǎng)艙溫度變化、培養(yǎng)基蒸發(fā)、細(xì)胞形態(tài)微調(diào)等因素,極易導(dǎo)致成像焦點(diǎn)偏移,出現(xiàn)畫面模糊、斷層問題。設(shè)備搭載高精度Z軸自動對焦系統(tǒng)與步進(jìn)掃描模塊,解決這一難題。實(shí)驗(yàn)前,系統(tǒng)可手動標(biāo)定各培養(yǎng)孔的參考焦點(diǎn)位置并保存;自動采集過程中,Z軸電機(jī)帶動鏡頭在參考焦點(diǎn)上下小范圍步進(jìn)掃描,實(shí)時計算畫面清晰度,動態(tài)鎖定對焦平面,全程無需人工干預(yù)。同時,設(shè)備支持多孔板全自動掃描,可依次完成6孔、24孔、96孔、384孔板的定點(diǎn)成像,無像素位移,大幅提升多組平行實(shí)驗(yàn)的成像效率與一致性。
(四)智能圖像采集與分析系統(tǒng):量化動態(tài)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
圖像采集組件采用高靈敏度CCD/CMOS成像傳感器,可高速捕捉微弱光學(xué)信號,實(shí)時輸出高清、連續(xù)的細(xì)胞動態(tài)圖像與視頻。采集的原始數(shù)據(jù)通過配套專業(yè)軟件進(jìn)行后臺處理,可自動完成細(xì)胞計數(shù)、形態(tài)分析、運(yùn)動軌跡追蹤、熒光強(qiáng)度定量、增殖速率統(tǒng)計、凋亡比例分析等多項(xiàng)數(shù)據(jù)處理工作。同時支持圖像、視頻、數(shù)據(jù)報表的實(shí)時存儲與導(dǎo)出,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞動態(tài)過程可視化、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確量化,為科研實(shí)驗(yàn)提供客觀、可追溯的數(shù)據(jù)支撐。
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