一、樣品前處理基本原則
微流成像儀依靠微流通道與光學(xué)成像進(jìn)行顆粒、細(xì)胞、微球等檢測(cè),樣品潔凈度、濃度、分散性直接影響成像效果與數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性,前處理核心是除雜質(zhì)、防團(tuán)聚、控濃度、除氣泡。
二、樣品稀釋與濃度控制
根據(jù)儀器量程稀釋樣品,避免濃度過(guò)高造成顆粒堆疊、重疊成像,濃度過(guò)低導(dǎo)致檢測(cè)數(shù)據(jù)不足。
優(yōu)先使用超純水、緩沖液稀釋?zhuān)WC與儀器微流體系兼容性,不產(chǎn)生沉淀結(jié)晶。
稀釋后充分輕柔混勻,禁止劇烈震蕩,防止產(chǎn)生大量氣泡干擾成像。
三、過(guò)濾除雜,避免通道堵塞
含有大顆粒、纖維、絮狀物的樣品,使用合適孔徑濾膜過(guò)濾,去除雜質(zhì),防止堵塞微流芯片與流道。
過(guò)濾后及時(shí)檢測(cè),避免長(zhǎng)時(shí)間放置出現(xiàn)沉降、團(tuán)聚。
油性、高粘度樣品可適當(dāng)稀釋降粘,保證樣品在微流通道內(nèi)穩(wěn)定流動(dòng)。
四、分散處理,防止顆粒團(tuán)聚
易團(tuán)聚樣品可低速渦旋、超聲短時(shí)間分散,超聲時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),避免顆粒破碎。
可添加少量分散劑,改善顆粒分散狀態(tài),提升成像清晰度。
生物類(lèi)樣品避免劇烈處理,防止細(xì)胞破損、形態(tài)改變。
五、除氣泡關(guān)鍵操作
樣品靜置脫氣,或低速離心去除微小氣泡。
進(jìn)樣前潤(rùn)洗進(jìn)樣管路與芯片,排盡管路空氣。
氣泡會(huì)造成陰影、偽影,導(dǎo)致粒徑、計(jì)數(shù)結(jié)果偏差,必須徹底去除。
六、生物樣品特殊前處理
細(xì)胞、微生物樣品保持適宜滲透壓,避免裂解變形。
血清、體液類(lèi)樣品離心去除細(xì)胞碎片、蛋白絮狀物,必要時(shí)過(guò)濾。
全程避光、控溫,維持樣品原有形態(tài)。
七、進(jìn)樣前檢查與注意事項(xiàng)
檢查樣品無(wú)沉淀、無(wú)分層、無(wú)明顯氣泡。
樣品溫度與儀器環(huán)境溫度接近,避免溫差產(chǎn)生氣泡。
前處理耗材潔凈,避免引入外來(lái)顆粒污染,造成假陽(yáng)性顆粒計(jì)數(shù)。