工作流程如下：

激光聚焦：單色性好的激光束被聚焦到樣品的特定焦平面上，激發熒光探針產生熒光。

針孔篩選：只有焦平面上的熒光信號能通過探測器前的針孔，來自非焦平面的雜散光會被針孔阻擋，從而獲得較高的圖像對比度。

掃描成像：激光束逐點、逐行掃描整個焦平面，計算機收集信號并重建出二維圖像。通過沿 Z 軸移動樣品，獲取一系列不同深度的切片，然后可重構出樣品的三維立體圖像。

激光共聚焦顯微鏡的主要特點：

高分辨率與對比度：有效排除非焦平面干擾，橫向分辨率可達約 120-200nm，成像質量遠超傳統寬場熒光顯微鏡。

三維立體成像：無需物理切片即可對樣品進行 “光學切片”，并通過軟件重構出三維結構，清晰展現樣品的空間形態。

多色熒光成像：可配備多種波長的激光器，同時激發樣品中不同的熒光探針，在同一張圖像上區分不同的目標結構。

活細胞動態觀察：對樣品損傷小，可在控溫、控濕等環境下，長時間實時追蹤活細胞內的動態生理過程。

*的分析能力：配套軟件可進行圖像增強、細胞計數、熒光強度定量、共定位分析等多種數據處理。