人軍團菌抗原ELISA試劑盒的具體操作步驟

時間：2026/7/21閱讀：40

該試劑盒僅用于科研實驗、2-8℃冷藏保存的背景，以下是完整的標準化操作步驟：

一、實驗前準備

試劑平衡：試劑盒從冷藏取出后，室溫放置15-30分鐘，讓所有組分恢復至室溫。

樣本預處理：血清/血漿樣本3000轉離心10分鐘取上清，-20℃凍存樣本室溫充分解凍混勻。

試劑配制：30倍濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋30倍，若有結晶可水浴加溫助溶。

二、核心操作流程

標準品稀釋：將原倍標準品用標準品稀釋液進行倍比稀釋，得到5個梯度的標準品工作液。

加樣：設空白孔、標準孔、待測樣品孔，標準孔加50μl標準品，樣品孔先加40μl樣品稀釋液，再加10μl待測樣本，輕晃混勻。

溫育：封板膜封板后，37℃恒溫箱溫育30分鐘。

洗板：揭掉封板膜，棄液甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復5次后拍干。

加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔不加。

二次溫育：再次封板，37℃溫育30分鐘。

二次洗板：重復之前的洗板操作，共5次后拍干。

顯色：每孔先加顯色劑A 50μl，再加顯色劑B 50μl，輕晃混勻，37℃避光顯色15分鐘。

終止：每孔加入終止液50μl，此時藍色反應液會轉為穩定黃色。

測定：以空白孔調零，15分鐘內用酶標儀在450nm波長下讀取各孔OD值。

三、結果計算

以標準品濃度為橫坐標、對應OD值為縱坐標繪制標準曲線，根據樣品OD值查出對應濃度，再乘以5倍稀釋倍數，得到樣本的實際抗原濃度。

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