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標(biāo)簽蛋白純化填料全解析：從原理到應(yīng)用的深度指南

閱讀：892 發(fā)布時(shí)間：2025-9-4

1. 金屬螯合填料

固定化金屬離子親和層析（Immobilized Metal Affinity Chromatography, IMAC）是一種廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)，特別是帶組氨酸標(biāo)簽（His-tag）的重組蛋白純化的技術(shù)。其核心原理是利用蛋白質(zhì)表面的氨基酸殘基（主要是組氨酸）與固定在層析介質(zhì)上的過(guò)渡金屬離子（通常是鎳離子, Ni2?）之間的親和力進(jìn)行選擇性分離。以下簡(jiǎn)練介紹三種常見(jiàn)的IMAC層析介質(zhì)：Ni-IDA，Ni-NTA和Ni-TED。

特點(diǎn)	Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF	Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF	Ni-TED瓊脂糖凝膠FF
結(jié)構(gòu)與螯合	IDA（Iminodiacetic acid）是一種三齒螯合劑，它通過(guò)三個(gè)位點(diǎn)（一個(gè)氮原子和兩個(gè)羧基氧原子）與鎳離子結(jié)合。這使得鎳離子上有三個(gè)剩余的配位點(diǎn)可與目標(biāo)蛋白的組氨酸標(biāo)簽結(jié)合	NTA（Nitrilotriacetic acid）是一種四齒螯合劑，它用四個(gè)位點(diǎn)（一個(gè)氮原子和三個(gè)羧基氧原子）來(lái)固定鎳離子。這為目標(biāo)蛋白的組氨酸標(biāo)簽留下了兩個(gè)可用的結(jié)合位點(diǎn)	TED（Tris(carboxymethyl)ethylenediamine）是一種五齒螯合劑，它通過(guò)五個(gè)位點(diǎn)牢固地螯合鎳離子，僅留下一個(gè)配位點(diǎn)與目標(biāo)蛋白結(jié)合
親和力/結(jié)合載量	高	高	一般
特異性	較低。鎳離子暴露的配位點(diǎn)較多，非特異性吸附的可能性也相應(yīng)增加	高。鎳離子被NTA更緊密地包裹，減少了非特異性結(jié)合	高。減少非特異性吸附，獲得高純度蛋白
螯合劑耐受性	不耐受	≤1 mM EDTA	≥10 mM EDTA
離子泄露風(fēng)險(xiǎn)	較高	低	極低
應(yīng)用	適用于對(duì)純度要求不高，或目標(biāo)蛋白表達(dá)量較高的常規(guī)純化	His標(biāo)簽蛋白純化的“金標(biāo)準(zhǔn)"，適用于大多數(shù)需要高純度蛋白的場(chǎng)景，是應(yīng)用較廣泛的IMAC介質(zhì)	適用于樣品中含有EDTA或DTT等干擾物質(zhì)（例如動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)），或者對(duì)蛋白純度有很高要求的純化任務(wù)

Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF系列使用流程圖

Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF系列使用流程圖

Ni-TED瓊脂糖凝膠FF系列使用流程圖

2. His標(biāo)簽蛋白純化填料參數(shù)：

類(lèi)別	Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF	Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF	Ni-TED瓊脂糖凝膠FF
基質(zhì)	6%交聯(lián)瓊脂糖
配基	亞氨基二乙酸，~30 μmol Ni²⁺/mL	次氮基三乙酸，~17 μmol Ni²⁺/mL	三羧甲基乙二胺，~60 μmol Ni²⁺/mL
粒徑范圍^a	45~165 μm
平均粒徑	~90 μm
動(dòng)態(tài)結(jié)合載量^b	≥40 mg/mL		≥20 mg/mL
推薦工作流速	60~300 cm/h
使用 pH	4~8.5（推薦的工作 pH），3~12（長(zhǎng)期穩(wěn)定）；2~14（短期穩(wěn)定）
化學(xué)穩(wěn)定性	在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、1 mol/L *、8 mol/L 尿素、6 mol/L 鹽酸胍、70%乙醇等。

注：

a：90%體積以上的微球在此粒徑范圍；

b：DBC10%測(cè)試條件為：10%流穿，大腸桿菌表達(dá)帶組氨酸標(biāo)簽的重組蛋白，6min停留時(shí)間。

3. 應(yīng)用數(shù)據(jù)：

圖6：Lane M： Marker

Lane 1 ：Start material

Lane 2: Flowthrough 1

Lane 3: Flowthrough 2

Lane 4: Elution (20 mM Imidazole)

Lane 5: Elution (50 mM Imidazole)

Lane 6: Elution (100 mM Imidazole)

Lane 7: Elution (200 mM Imidazole)

Lane 8: Elution (300 mM Imidazole)

Lane 9: Elution (500 mM Imidazole)

填料： Ni-IDA 瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）（Cat: abs91007-G），1mL

樣品：his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli

結(jié)合緩沖液：20 mM PB, 150 mM NaCl, pH 7.4

洗脫緩沖液：20 mM PB, 150 mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH 7.4

圖7：填料：Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱）（Cat: abs91008-M），1mL

樣品：his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli

結(jié)合緩沖液：20 mM PB, 150 mM NaCl, pH 7.4

洗脫緩沖液：20 mM PB, 150 mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH 7.4

其他標(biāo)簽蛋白親和純化

特點(diǎn)	GST瓊脂糖凝膠FF	MBP瓊脂糖凝膠FF	生物素瓊脂糖凝膠FF	Strep II瓊脂糖凝膠FF
填料配基	谷胱甘肽	糊精	鏈霉親和素	鏈霉親和素突變體
作用的標(biāo)簽	GST (Glutathione S-transferase)，~26 kDa	MBP (Maltose-Binding Protein)，~42 kDa的蛋白	生物素標(biāo)記（通過(guò)生物素連接酶（BirA）定點(diǎn)連接到目標(biāo)蛋白的特定序列（如AviTag）上，也可以通過(guò)化學(xué)方法非特異性連接	Strep II，8個(gè)氨基酸組成的短肽 (WSHPQFEK)
純化原理	GST標(biāo)簽?zāi)芘c固定化在介質(zhì)上的谷胱甘肽發(fā)生特異性、可逆的結(jié)合	MBP標(biāo)簽?zāi)軌蛱禺愋缘刈R(shí)別并結(jié)合介質(zhì)上的糊精	生物素與鏈霉親和素之間存在自然界中較強(qiáng)的非共價(jià)相互作用之一	Strep II標(biāo)簽?zāi)軌蚺c鏈霉親和素突變體的生物素結(jié)合口袋發(fā)生高親和力、高特異性的可逆結(jié)合
洗脫方法	使用還原型谷胱甘肽（Reduced Glutathione）進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性洗	使用高濃度的麥芽糖（Maltose）溶液進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性洗脫	變性洗脫	使用D-生物素（D-biotin）溶液進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性洗脫

GST瓊脂糖凝膠FF應(yīng)用：

Lane M： Marker

Lane 1： Start material

Lane 2: Flowthrough

Lane 3: Elution

填料：GST瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）（Cat: abs91010-G），1mL

樣品: GST-SUMO produced in E. coli

結(jié)合緩沖液: 20 mM PB, 150 mM NaCl, pH 7.4

洗脫緩沖液: 20 mM PB, 150 mM NaCl, 10 mM glutathione, pH 7.4

MBP瓊脂糖凝膠FF應(yīng)用：

Lane M： Marker

Lane 1： Start material

Lane 2: Flowthrough

Lane 3: Elution

填料：MBP瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）（Cat: abs91011-G），1mL

樣品: MBP produced in E. coli

結(jié)合緩沖液: 20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, pH7.4

洗脫緩沖液: 20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 10 mM D-maltose, pH7.4

Lane M： Marker

Lane 1： Start material

Lane 2: Flowthrough

Lane 3: Elution

填料：Strep II瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）（Cat: abs91013-G），1mL

樣品: Strep II-tagged EGF produced in E. coli

結(jié)合緩沖液：20 mM Tris-HCl, 500 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 8.0

洗脫緩沖液：20 mM Tris-HCl, 500 mM NaCl, 1 mM EDTA, 10mM D-Biotin, pH 8.0

4. 愛(ài)必信標(biāo)簽蛋白純化填料產(chǎn)品信息

實(shí)驗(yàn)操作視頻請(qǐng)點(diǎn)擊：

商品貨號(hào)	商品名稱(chēng)
abs91008-G	Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）
abs91008-M	Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱）
abs91008-F	Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF
abs91007-G	Ni-IDA 瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）
abs91007-M	Ni-IDA 瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱）
abs91007-F	Ni-IDA 瓊脂糖凝膠FF
abs91009-F	Ni-TED 瓊脂糖凝膠FF
abs91009-G	Ni-TED 瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）
abs91009-M	Ni-TED 瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱）
abs91010-F	GST瓊脂糖凝膠FF
abs91010-G	GST瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）
abs91010-M	GST瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱）
abs91011-F	MBP瓊脂糖凝膠FF
abs91011-G	MBP瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）
abs91011-M	MBP瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱）
abs91012-F	生物素瓊脂糖凝膠FF
abs91012-G	生物素瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）
abs91012-M	生物素瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱）
abs91013-F	Strep II瓊脂糖凝膠FF
abs91013-G	Strep II瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）
abs91013-M	Strep II瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱）

好消息！Absin文獻(xiàn)獎(jiǎng)勵(lì)重磅升級(jí)！

Absin產(chǎn)品線(xiàn)：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測(cè)、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè))；細(xì)胞培養(yǎng)(類(lèi)器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

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