一、實驗準備

1、hPSC誘導分化胰島類器官試劑盒（abs90131-1kit）

產品組成：

2、輔助試劑

3、實驗耗材

二、誘導流程圖

三、試劑盒使用流程：

①EB 形成（2 天）

1、hPSC 于基質膠包被的標準透明6孔板的一個孔，加入2mLAdvance 人多能干細胞培養基，使細胞生長至 70-80%匯合度。

2、將孔中的培養基吸除。

3、在消化期間配置EB形成wan全培養基：取 11mL EB 形成培養基與 22μL EB 形成補充劑混勻獲得 EB 形成wan全培養基，于一個新的超低吸附 6孔板的 3 個孔每孔加入 2mL EB 形成wan全培養基，準備后續使用。

4、向孔中加入 1mL PBS（無鈣鎂離子）洗，吸去。

5、向孔中加入 1mL accutase，37℃消化 3min。

6、當看到克隆發白發亮，輕輕拍打板側（每側拍兩下），把細胞拍下來，再在生物安全柜中，加入 1mL EB 形成wan全培養基終止消化，把這 2mL 體系吸入裝有 3mL EB 形成wan全培養基的15mL 離心管離心 160g 5min，吸棄上清至剩余幾十微升，輕彈管底 3-4 下，讓細胞沉淀溶于上清。

7、往管里加 1mL EB 形成wan全培養基，輕彈 3-4 下，混勻即可，把這1mL細胞懸液平均懸空加入提前準備的超低吸附 6孔板3 個孔中，37℃、5%CO₂過夜。

8、第二天（D-1）鏡下觀察可以看到形成大量、均一的 EB，半數換液，補充 50%EB 形成培養基（不含補充劑），置于水平搖床培養。（注意：所用培養基均應提前在工作臺放置 30min以恢復室溫，后面操作同理。）

②DE 誘導（5 天）

9、D0，解凍補充劑 A，將基礎培養基 1 與補充劑 A 混勻，作為 DE 誘導培養基，恢復室溫。

10、吸出孔中 EB 形成培養基，注意不要將 EB 吸出。

11、每孔加入 2mL DE 誘導培養基，放入 37℃，5%CO₂的培養箱繼續培養。

12、每天更換 DE 誘導培養基，持續 5 天。

③PE 誘導（6天）

13、D5，解凍補充劑 B，將基礎培養基 2 與補充劑 B 混勻，作為 PE 誘導培養基。每孔每天更換 2mL PE 誘導培養基，操作如 9、10，持續 6 天。

④EP 誘導（5天）

14、D11，解凍補充劑 C，將基礎培養基 3 與補充劑 C 混勻，作為 EP 誘導培養基。每孔每天更換 2mL EP 誘導培養基，操作如 9、10，持續 5 天。

⑤胰島類器官成熟階段（以20天為例）

15、D16，解凍補充劑D，將基礎培養基4與補充劑D混勻，作為胰島類器官成熟培養基。每孔每天更換2mL成熟培養基，操作如 9、10，持續20天。

本期小愛推薦

好消息！Absin文獻獎勵重磅升級！

Absin產品線：

爆款產品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細胞培養(類器官試劑盒+基質膠，胎牛血清+培養添加劑+細胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...

特色產品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...