THP-1 是人單核細胞白血病細胞，是單核巨噬細胞分化、炎癥、免疫相關研究常用懸浮模式細胞。細胞懸浮生長，狀態佳時大小均一、折光性強，部分細胞會自然聚集成小團，對血清、培養基和細胞密度均高度敏感，狀態極易受環境、操作、血清質量影響，本文將針對THP-1的細胞培養流程進行梳理和指導。

一、細胞復蘇

1.【準備工作】水浴鍋提前預熱至 37℃；準備 9ml 培養基在37℃條件下預熱；生物安全柜提前使用紫外照射 30min；

2.【融化】從液氮取出凍存管，37℃水浴快速搖晃融化，約 1-2min；

3. 【重懸】使用75% 酒精擦拭凍存管外壁，生物安全柜內開蓋，將細胞懸液緩慢滴入裝有 9ml 預熱wan全培養基的 15mL 離心管中；

4.【離心】600rpm 離心 5min，棄上清；

5.【重懸】加入1mlwan全培養基輕輕吹打10次細胞懸液。準備一個新的10cm培養皿，在皿蓋上標注細胞名稱、傳代人、代數、日期。加入9mlwan全培養基，再加入1ml細胞懸液。畫十字混勻，使細胞在皿中均勻分布；

6.【培養】放入培養箱中培養。

二、細胞傳代

1.【實驗準備】配制wan全培養基：1640 基礎培養基（abs9484-500mL） + 10% FBS（abs972-500mL）+1% 雙抗 (P/S)（abs9244-100ml）；提前取出PBS（abs962-500ml）、wan全培養基，恢復至室溫；生物安全柜提前使用紫外照射30min。

注意：該細胞傳代過程中所有試劑均需要恢復至室溫。

2.【鏡檢】在顯微鏡下觀察細胞，細胞密度約80%、輕輕晃動培養皿有大量懸浮的細胞，培養基顏色輕微變黃時即可進行傳代；

3.【細胞收集】將所有細胞懸液收集至 15mL 離心管中；

4.【離心】600rpm 離心 5min后，用槍頭吸棄上清；加入 3ml wan全培養基，輕柔吹打 10 次左右重懸細胞；

注意：如果細胞狀態較差或者細胞碎片較多，在這一步棄去上清后，加入10mlPBS吹打重懸，600rpm離心去上清后再進行傳代。

注意：該細胞對操作較為敏感，吹打時務必不要大力吹打，容易造成細胞損傷。

注意：該細胞傳代比例建議為1:3-1:4，可根據傳代比例加入適量wan全培養基。

5.【傳代】準備一個新的10cm培養皿，在皿蓋上標注細胞名稱、傳代人、代數、日期。加入9mlwan全培養基，再加入1ml細胞懸液。畫十字混勻，使細胞在皿中均勻分布；

6.【鏡檢】在顯微鏡下觀察細胞狀態及細胞是否均勻分布，放入37℃，5%CO2培養箱中培養，每隔24H觀察細胞狀態；

注意：該細胞傳代密度一般為1:3。低密度會導致細胞增殖慢、細胞狀態變差。該細胞對血清敏感，建議使用愛必信優級血清，劣質血清容易導致細胞出現長角的情況。

三、細胞凍存

1.【準備工作】細胞凍存液可使用無血清細胞凍存液（abs9417-100mL），也可以自行配制：90%FBS（abs972-500mL）+10%DMSO（abs9187-100mL）。存管提前標注：細胞名稱、代數、凍存人、凍存日期。生物安全柜提前使用紫外照射30min；

注意：單個皿可凍存3只。

2.【細胞收集】細胞密度長到80%左右，按照傳代步驟進行細胞收集，600rpm離心之后棄上清；

3.【細胞重懸】加入3ml細胞凍存液，輕輕吹打重懸細胞；

4.【凍存】每管加入1ml混合液至凍存管中，將凍存管放入凍存盒中，放入-80℃冰箱，過夜后轉移至液氮罐中。

四、關鍵注意事項

1、嚴格控制傳代密度
該細胞傳代密度一般為1:3。低密度會導致細胞增殖慢、細胞狀態變差。

2、血清及培養基選擇
該細胞需使用優級血清培養；劣質血清容易導致細胞出現長角的情況。

3、污染控制
易支原體感染，表現為長勢慢、形態變差；定期支原體檢測，操作全程無菌。

4、操作
該細胞對操作較為敏感，建議吹打時務必不要大力吹打，容易造成細胞損傷。傳代時所有試劑需恢復至室溫。

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