減少假陽性的概率:單拷貝基因在基因組中通常只有一個拷貝,是物種特異性的“ID"。它能有效減少多拷貝基因家族(如線粒體基因)中同源序列的干擾,有效降低不同物種間PCR交叉擴增的發(fā)生。 當(dāng)然,即便您的DNA序列是單拷貝的特異性序列,也不能排除PCR交叉擴增的發(fā)生。因為即便有幾個DNA堿基的差異,也還是可能PCR交叉擴增。通常,特異性的引物探針設(shè)計需要通過PCR實驗來驗證特異性。即便很多現(xiàn)行動物源性標(biāo)準(zhǔn)中的引物探針也存在交叉PCR擴增反應(yīng),需要嚴(yán)格控制DNA上樣量和結(jié)合其他物種的檢測結(jié)果來綜合判斷。當(dāng)然,也有特異性好的引物探針設(shè)計,這個需要用戶通過實驗來驗證。
真實反映含量(定量優(yōu)勢):線粒體基因由于在不同組織細(xì)胞內(nèi)的含量不一,因此無法有效作為定量檢測的方法。單拷貝基因由于拷貝數(shù)與細(xì)胞數(shù)量呈嚴(yán)格的比例關(guān)系(1:1),單拷貝基因檢測是進(jìn)行動物源性成分定量分析的選擇。它能相對客觀反映樣本中某種動物成分的相對含量,而非僅僅是“有"或“無"。科技人員可采用數(shù)字PCR的絕對定量方法來進(jìn)行定量,也可以同一管中qPCR檢測單拷貝的通用動物基因來判斷動物源性的比列。
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