制備工藝主要四條路線。化學(xué)鍵合法最為牢固，微球表面經(jīng)氨基硅烷修飾引入活性基團(tuán)，再與熒光染料共價偶聯(lián)，如FITC異硫氰酸基與氨基反應(yīng)，結(jié)合穩(wěn)定。共聚法將帶可聚合官能團(tuán)的熒光單體與有機(jī)單體一同聚合，熒光分布最均勻，是理想方案。包埋法將熒光材料分散于介質(zhì)中經(jīng)聚合形成核殼結(jié)構(gòu)，可負(fù)載多重信號。吸附法靠靜電作用將熒光物質(zhì)吸附于表面，操作最簡但穩(wěn)定性最差。以FITC標(biāo)記聚苯乙烯微球為例：苯乙烯超聲聚合制納米球，氨基硅烷引入氨基，再與FITC室溫避光反應(yīng)1小時即成。

　　質(zhì)控是生命線，三維度缺一不可。光譜驗證須確保激發(fā)發(fā)射波長與目標(biāo)染料一致，偏移即示產(chǎn)物不純；標(biāo)記效率經(jīng)紫外分光光度計測定，優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品標(biāo)記率須≥80%；HPLC純度須≥95%，無游離染料殘留。定量應(yīng)用中標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率應(yīng)在-3.32左右，R²≥0.9913，日間CV控制在5%至10%以內(nèi)。每次運行必須同步設(shè)陽性與陰性對照，這是不可妥協(xié)的底線。