SDS:作為陰離子去污劑,SDS 能與蛋白質分子充分結合,使蛋白質變性并帶上大量負電荷。其與蛋白質的結合比例約為 1.4g SDS/g 蛋白質,這種強結合能力確保蛋白質解聚為亞基,并均勻地分布在溶液中,消除了蛋白質本身電荷和空間結構對遷移率的影響,使得蛋白質在電泳中的遷移僅取決于其分子量大小。
β - 巰基乙醇:具有強還原性,可切斷蛋白質分子中的二硫鍵,使蛋白質的高級結構被破壞,充分伸展為線性分子。這一過程不僅有助于 SDS 與蛋白質的結合,還能進一步保證蛋白質在電泳過程中按分子量大小進行分離,提高電泳的分辨率。
甘油:能增加樣品的密度,使加入的樣品能夠沉入加樣孔底部,避免樣品在電泳緩沖液中擴散,保證樣品在凝膠中的起始位置一致,從而提高電泳結果的重復性和準確性。
Tris - HCl(pH6.8):維持緩沖液的 pH 穩定,為蛋白質變性提供適宜的酸堿環境。穩定的 pH 值對于 SDS 與蛋白質的結合以及蛋白質的變性過程至關重要,能確保實驗條件的一致性,減少因 pH 波動導致的實驗誤差。
溴酚藍:作為指示劑,溴酚藍在電泳過程中隨蛋白質一同遷移,其遷移速度比大多數蛋白質快,通過觀察溴酚藍的位置,科研人員可以大致判斷電泳的進程,方便控制電泳時間,避免過度電泳或電泳時間不足對結果造成影響。
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