ProFlex 2x96 PCR操作指南
ProFlex2×96PCR儀是一臺擁有兩個獨立96孔模塊的PCR系統。它能實現兩臺儀器的工作效率,操作的核心在于理解每個模塊的獨立性。以下操作指南將幫你快速上手,掌握雙模塊并行的技巧。
一、開機與界面導覽
開機自檢:接通電源,按下前面板的電源開關,儀器啟動并執行自檢。
主界面布局:觸摸屏亮起后,主界面會清晰地顯示模塊A和模塊B的狀態。每個模塊都有獨立的控制圖標和狀態顯示,這是進行所有操作的入口。
二、創建與設置PCR程序
ProFlex2×96允許為兩個模塊設置獨立的程序。
1.進入編輯模式
觸摸屏上點擊你想要設置的模塊(例如模塊A),進入該模塊的操作界面,然后選擇“新建"或“編輯"程序。
2.設置溫度步驟與循環
程序編輯界面以表格形式展示,每一行代表一個步驟。點擊溫度或時間數值即可修改。
一個典型的PCR程序包含:
預變性:95°C,5分鐘。
循環步驟:95°C變性30秒→55°C退火30秒→72°C延伸30秒,此循環進行30-35次。
終延伸:72°C,5分鐘。
低溫保持:4°C或10°C。
如何添加循環?
在編輯界面點擊“添加循環",設定循環數(如30),然后將變性、退火、延伸三個步驟拖入循環體內。
3.為模塊B設置程序
返回主界面,點擊模塊B的圖標,重復上述步驟,為其設置相同或不同的程序。
應用技巧:你可以為模塊A設置常規擴增程序,同時為模塊B設置梯度優化程序,實現“一機兩用"。
三、運行梯度功能(快速優化退火溫度)
每個96孔模塊都支持獨立的3區梯度,這是優化新引物退火溫度的重要工具。
在某個模塊的程序編輯界面,找到并選中退火步驟。
點擊界面上的“梯度"或“Gradient"選項。
設置期望的中間溫度(如55°C),儀器會自動將96孔板分為上、中、下三個區域,分別設定不同的溫度(如53°C,55°C,57°C)。溫度差異可調。
保存程序并運行,一次實驗即可找到理想的退火溫度。
四、裝載樣品與啟動運行
裝載樣品:打開儀器熱蓋,將配制好反應液的0.1mL或0.2mLPCR管、8聯管或96孔板,平穩放入對應的模塊中。
關閉熱蓋并鎖定:分別壓下每個模塊的熱蓋,確保聽到鎖扣閉合的“咔嗒"聲。熱蓋未鎖緊,模塊將不會啟動加熱。
啟動運行:返回主界面,確認兩個模塊的程序設置無誤后,可分別或統一點擊“開始"按鈕啟動。儀器會先加熱熱蓋,再進入預設程序。
運行監控:運行中,觸摸屏可隨時切換查看兩個模塊的實時溫度、剩余時間和循環進度。ProFlex2×96也支持通過ThermoFisherConnect進行遠程監控。
五、實驗結束與日常維護
結束與取樣:程序運行結束后,儀器自動降至4°C或室溫保持。打開熱蓋,小心取出樣品。注意熱蓋和模塊表面可能有余溫。
數據保存:可在屏幕上查看運行記錄,或通過USB導出實驗數據。
清潔與保養:
每次使用后:用無塵布蘸取少量70%乙醇,輕輕擦拭模塊孔內壁和熱蓋內側,去除冷凝水和殘留物。
定期檢查:每月檢查一次熱蓋密封圈是否完好。
年度校準:建議每年進行一次溫度驗證,確保實驗結果的準確性。
總結
掌握ProFlex2×96PCR儀的操作,關鍵在于理解其雙模塊獨立運行和單模塊梯度優化的能力。通過為兩個模塊分別設置程序,你可以利用這臺儀器,高效完成常規擴增與條件優化的并行實驗。
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