qubit檢測范圍
Qubit熒光定量儀的檢測范圍并非固定不變,它取決于你選用的試劑盒類型。不同的試劑盒就像不同量程的尺子,分別對應高靈敏度(HS)和寬范圍(BR)等不同需求。
以下是實驗室常用的幾種Qubit檢測試劑盒及其對應的核心檢測范圍,供你快速參考。
一、常用Qubit試劑盒檢測范圍一覽
dsDNAHS(高靈敏度):適用于微量、珍貴的DNA樣本,如NGS文庫、細胞游離DNA等。初始樣本濃度在0.01-10ng/µL之間時,結果較準確。
dsDNABR(寬范圍):適用于大多數常規(guī)分子生物學實驗中的DNA定量。初始樣本濃度在0.1-120ng/µL之間時,結果較準確。
RNAHS(高靈敏度):適用于RNA-Seq等對RNA濃度敏感的下游實驗。初始樣本濃度在0.02-10ng/µL之間時,結果較準確。
RNABR(寬范圍):適用于一般的RNA定量。初始樣本濃度在0.5-60ng/µL之間時,結果較準確。
ssDNA(單鏈DNA):適用于引物、探針等寡核苷酸的定量。初始樣本濃度在0.01-8ng/µL之間時,結果較準確。
Protein(蛋白質):適用于蛋白質濃度測定。初始樣本濃度在0.5-20µg/µL之間時,結果較準確。
二、Qubit與Nanodrop檢測范圍的差異
在實際應用中,Qubit與Nanodrop的檢測范圍是互補的,它們適用于不同的場景。
Qubit的靈敏度很高,尤其適合檢測低濃度的樣本(如pg/µL級別)。但它對高濃度樣本(如µg/µL級別)的耐受性不如Nanodrop,高濃度時容易飽和。
Nanodrop的優(yōu)點是范圍廣,從2ng/µL到15,000ng/µL都能覆蓋,無需稀釋即可直接測量高濃度樣品。但它的靈敏度有限,在低濃度范圍(<2ng/µL)準確性會下降。
因此,在實驗中可以根據樣本情況靈活選擇:當樣本珍貴且濃度很低,或者需要區(qū)分DNA、RNA時,用Qubit會更準確;當樣本量充足、濃度較高,需要快速獲得純度比值(如A260/A280)作為參考時,用Nanodrop會更方便。
三、選擇試劑盒時的一些思路
Qubit檢測的精髓在于“對癥下藥",根據你的樣本情況選擇合適的試劑盒,就能獲得比較理想的結果:
看樣本濃度:如果樣本濃度很低或非常珍貴(如臨床樣本、NGS文庫),優(yōu)先選擇“HS"系列。
看樣本純度:如果樣本含有較多雜質(如蛋白、鹽離子),Qubit的選擇性優(yōu)勢會更明顯,而Nanodrop可能會被嚴重干擾。
看實驗目的:如果后續(xù)實驗對核酸的起始量要求很高(如qPCR、NGS建庫),Qubit的準確定量就很有必要。
總結
總之,Qubit的檢測范圍因試劑盒而異,覆蓋了從pg/µL到µg/µL級別的多個區(qū)間。在實際使用中,可以根據樣本的濃度和純度靈活選擇合適的試劑盒,以確保定量結果的準確性。
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