產品概述

本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗RIF1多克隆抗體（貨號：A300-568A），采用表位特異性親和純化工藝制備，以完整IgG形式提供。該抗體針對人RIF1蛋白第1425至1450位氨基酸之間的表位設計，能夠特異性識別全長RIF1，適用于人源樣本的免疫檢測。RIF1（Rap1相互作用因子1）是DNA損傷應答和端粒穩態維持的關鍵調控蛋白，參與ATM/ATR介導的信號通路，在S期檢查點控制及雙鏈斷裂修復中發揮核心作用。本抗體經驗證適用于IHC、IP及WB等多種應用。

核心規格參數

參數 | 具體信息

靶標 | RIF1

反應種屬 | 人

應用 | IHC、IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原 | RIF1第1425至1475位氨基酸（核心表位位于1425-1450）

亞型 | IgG

標記物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 µg/ml（1 mg/ml）

儲存 | 2 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊d化鈉

儲存與穩定性

儲存溫度：2 8 °C

有效期：1年

緩沖體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8），含0.09%疊d化鈉

疊d化鈉作為防腐劑存在。在使用HRP標記二抗進行檢測時，需注意疊d化鈉對過氧化物酶的抑制作用。如需進行細胞活性實驗或功能性研究，建議通過透析或超濾去除疊d化鈉。

推薦應用與稀釋度

以下為經過驗證或推薦的應用條件：

應用類型 | 推薦稀釋度/用量 | 關鍵條件

免疫組織化學（IHC） | 1:500 1:2,000 | 推薦使用檸檬酸鹽緩沖液pH 6.0進行抗原修復（FFPE切片）

免疫沉淀（IP） | 6 µg/mg裂解物 | 每毫克總蛋白裂解液使用6 µg抗體

蛋白質印跡（WB） | 1:10,000 1:25,000 | 推薦使用3-8% Tris-醋酸凝膠；5% Milk-TBST封閉和稀釋

RIF1的核心生物學功能

RIF1最初在酵母中被鑒定為端粒結合蛋白RAP1的相互作用因子，參與端粒長度調控。在人細胞中，RIF1的功能已擴展至多個DNA代謝領域：

1. DNA雙鏈斷裂修復調控

RIF1是ATM和ATR介導的DNA損傷應答通路的關鍵下游效應因子。在發生雙鏈斷裂（DSB）后，RIF1迅速被招募至損傷位點形成核內焦點。這一過程w全依賴于ATM激酶活性——ATM磷酸化RIF1或其上游調控蛋白，促進RIF1的損傷位點定位。

2. 53BP1通路的效應因子

RIF1與53BP1協同作用，在G1期促進DNA末端連接（經典非同源末端連接，c-NHEJ），同時抑制同源重組修復。RIF1通過調控修復通路選擇，對基因組穩定性維持至關重要。

3. 復制時序調控

RIF1參與調控DNA復制的時空程序。它影響復制起點的激活時序，確保基因組的不同區域在S期正確的時間段完成復制。RIF1缺失導致復制時序紊亂，基因組不穩定性增加。

4. 端粒穩態維持

在端粒功能失調時，RIF1定位于端粒末端，參與端粒保護及端粒延長替代機制（ALT）的調控。

疾病相關性

腫瘤發生：RIF1在多種癌癥中表達異常，其過表達或缺失均可導致基因組不穩定，促進腫瘤進展

化療耐藥：RIF1通過促進NHEJ修復，參與腫瘤細胞對DNA損傷性化療藥物（如PARP抑制劑、鉑類藥物）的抵抗

發育異常：RIF1功能缺陷與胚胎致死及發育異常相關

常見問題與解決方案

問題 | 可能原因 | 建議措施

WB無270 kDa條帶 | 凝膠體系不適用于大蛋白 | 更換為3-8% Tris-醋酸凝膠；使用大蛋白專用轉印條件

出現多條非預期條帶（~150-200 kDa） | RIF1降解或非特異性結合 | 使用新鮮制備的裂解液，添加廣譜蛋白酶抑制劑混合物；提高一抗稀釋度至1:20,000

IP下拉產物中RIF1信號弱 | RIF1分子量大，洗脫/轉印效率低 | 增加IP抗體用量至10 µg/mg；洗脫后上樣前不離心；使用大蛋白WB條件

IHC無核染色 | 抗原修復不當或組織固定過度 | 確保檸檬酸鹽緩沖液pH 6.0用于熱修復；嘗試使用蛋白酶K消化作為替代方案；縮短固定時間

IHC焦點狀染色無法觀察 | 未對細胞施加DNA損傷處理 | RIF1在正常細胞中為彌散核染色，DNA損傷處理后出現點狀焦點

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