LSD1（KDM1A）是s個被發現的組蛋白去甲基化酶，特異性催化組蛋白 H3 第4位賴氨酸（H3K4）的單甲基化和二甲基化去除，在轉錄抑制、激活及表觀遺傳調控中發揮雙重功能。該抗體 A300-215A 經抗原親和純化，靶向人 LSD1 蛋白 N 端第 50–100 位氨基酸區域，適用于染色質免疫沉淀（ChIP）、免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）。特別地，其 WB 稀釋范圍高達 1:5,000–1:15,000，且 ChIP?seq 應用已有文獻支持。本文從由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗BHC110/LSD1親和純化抗體（貨號：A300-215A）的規格、免疫原設計、實驗優化流程、功能背景及故障排查等方面提供全面技術參考。

一、產品基本規格與儲存信息

參數| 內容

靶標| BHC110/LSD1（KDM1A）

反應性 | 人類

應用| ChIP、IHC、IP、WB

宿主/克隆性 | 兔 / 多克隆

形式| 完整 IgG

免疫原 | 第25至75位氨基酸之間（具體表位位于第50–100位）

亞型| IgG

標記物 | 未標記

純度| 抗原親和純化

抗原種屬| 人類

濃度| 1000 µg/ml（1 mg/ml）

保存條件| 2?–?8?°C

有效期 | 自收貨之日起 1 年

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7–8，含 0.09% 疊d化鈉

關鍵儲存提示：  

始終保存于 2–8?°C，嚴禁冷凍，冷凍會導致抗體聚合并喪失活性。  

疊d化鈉為防腐劑，可能抑制 HRP 活性；若用于活細胞或體內實驗，需通過脫鹽柱去除。  

濃度采用比爾定律標定（A280?=?1.4 對應 1?mg/mL IgG），便于精確稀釋。

二、推薦應用與實驗條件

免疫印跡（Western Blot, WB）

推薦稀釋范圍：1:5,000 – 1:15,000（j高靈敏度，經濟性突出）  

封閉液與抗體稀釋液：5% 脫脂牛奶 / TBST  

一抗孵育：4?°C 過夜  

二抗推薦：Goat anti?Rabbit IgG (H+L) HRP（A120-101P）  

檢測方式：增強型化學發光（ECL）

WB 優化流程

1. 樣本制備：  

陽性對照：HeLa、HEK293、MCF?7 等人源細胞系全裂解液。  

裂解液：RIPA（含蛋白酶抑制劑），LSD1 穩定表達，常規上樣 20–30?μg。

2. 電泳：使用 8–10% SDS?PAGE（LSD1 分子量約 110?kDa）。  

3. 轉印：PVDF 膜，250?mA 恒流 90 分鐘。  

4. 封閉：5% 牛奶 / TBST，室溫 1 小時。  

5. 一抗：用 5% 牛奶 / TBST 稀釋至 1:5,000–1:15,000（s次建議 1:5,000）。  

6. 洗滌：TBST 洗滌 3×10 分鐘。  

7. 二抗：HRP?山羊抗兔（1:10,000），室溫 1 小時。  

8. ECL 檢測。

預期結果：約 110?kDa 處單一條帶。若出現多條帶，可能為降解產物（常見約 55?kDa）或非特異，提高稀釋度至 1:15,000 可顯著改善。

免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

用量：6?μg 抗體 / mg 總蛋白裂解液  

裂解液：非變性條件（50?mM Tris pH 7.4, 150?mM NaCl, 1% NP?40，抑制劑 cocktail）。

IP 步驟

1. 裂解細胞，取 1?mg 總蛋白。  

2. 加入 6?μg A300-215A 抗體，4?°C 旋轉孵育過夜。  

3. 加入 Protein?A 磁珠，繼續孵育 2 小時。  

4. 洗滌 4–5 次，洗脫（SDS 上樣緩沖液，95?°C 10 分鐘）。  

5. WB 檢測（使用輕鏈特異性二抗消除重鏈干擾）。

注意：IP 后 WB 時，由于 LSD1 分子量 110?kDa，遠高于重鏈（55?kDa），常規二抗也可使用；但為獲得最潔凈背景，推薦 抗兔 IgG 輕鏈 HRP 二抗 + 5% 正常豬血清（S100?020）。

免疫組織化學（Immunohistochemistry, IHC）

推薦稀釋范圍：1:500 – 1:2,000  

抗原修復：檸檬酸鈉緩沖液（pH 6.0），高壓或微波熱修復 10–15 分鐘。  

樣本類型：福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）的人組織切片。  

封閉：5% 正常血清/BSA，室溫 30 分鐘。  

檢測：HRP/DAB 或熒光二抗。

提示：LSD1 在多種細胞核中表達，IHC 染色應為核陽性。建議使用扁桃體或乳腺癌組織作為陽性對照。

染色質免疫沉淀（ChIP）與 ChIP?seq

用量：10?μg 抗體 / ChIP 反應（參照文獻：Ram O et al., Cell 2011;147(7):1628-39）  

靶標：LSD1 占據的染色質區域（通常為轉錄活躍或抑制性啟動子）。  

實驗建議：  

使用 1–2?×?10? 細胞 / ChIP 反應。  

交聯：1% 甲醛，室溫 10 分鐘。  

染色質剪切至 200–500?bp（超聲或酶切）。  

抗體用量 10?μg，4?°C 過夜孵育。  

Protein?A/G 磁珠捕獲，洗滌、洗脫、解交聯，DNA 純化后 qPCR 或測序。

文獻驗證：先前批次抗體已成功用于 ChIP?seq（見上述 Cell 文章），該批次經親和純化保留相同表位，預期性能一致。

三、該抗體的核心優勢

四重應用驗證：ChIP、IHC、IP、WB 全覆蓋，一套抗體滿足從蛋白水平到染色質水平的完整研究需求。  

極寬 WB 稀釋度（1:5,000–1:15,000）：1?mg 抗體可配制 5–15?L 工作液，性價比j高。  

文獻支持 ChIP?seq：引用明確，降低方法學驗證風險。  

IHC 明確方案：提供檸檬酸修復條件和稀釋范圍，即用型參數。  

親和純化低背景：確保 IP 和 ChIP 特異性。  

液態穩定保存：2–8?°C 一年，無需分裝凍融。