產品概述
本產品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對人源AMPK alpha 1蛋白催化亞基的兔多克隆抗體,貨號A300-507A??贵w以未標記的完整IgG形式提供,適用于免疫組化(IHC)、免疫沉淀(IP)和蛋白質印跡(WB)應用。該抗體經抗原親和純化,特異性識別AMPK alpha 1蛋白中部區域(第375-425位氨基酸殘基之間的表位),對人源和小鼠源AMPK alpha 1均有反應性,可用于能量代謝調控、信號轉導及相關疾?。ㄈ缣悄虿?、肥胖、癌癥)研究。
核心參數
參數 詳細信息
靶標 AMPK alpha 1(PRKAA1)
反應種屬 小鼠、人
應用 IHC, IP, WB
宿主 兔
克隆性 多克隆
形式 完整IgG
免疫原區域 第375-425位氨基酸(參考序列BAA36547.1)
同型 IgG
偶聯物 未偶聯
純度 抗原親和純化
濃度 1000 µg/ml
保存條件 2 8 °C
有效期 收貨后1年
緩沖液 Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液,pH 7-8,含0.09%疊d化鈉
制備與純化
本抗體采用固相固定化技術,使用特異性針對AMPK alpha 1蛋白的表位進行親和純化。具體而言,識別表位定位于人源5'-AMP活化蛋白激酶催化亞基alpha-1鏈(AMPK alpha 1)的第375至425位氨基酸區域(基于GeneID 5562,序列編號BAA36547.1)。免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定,設定1 mg/mL IgG在A280波長的吸光度為1.4。
應用與推薦稀釋度
蛋白質印跡(Western Blot, WB)
推薦稀釋度:1:10,000 – 1:25,000
操作規范:
所有WB實驗均使用5% Milk-TBST作為封閉液和抗體稀釋液
一抗孵育條件:過夜孵育
細胞裂解液的WB檢測:使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體(貨號A120-101P)
免疫沉淀物的WB檢測:使用HRP標記的抗兔IgG輕鏈抗體,并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清(貨號S100-020)
免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)
推薦用量:6 µg抗體 / mg裂解液蛋白
免疫組化(Immunohistochemistry, IHC)
推薦稀釋度:1:1000 – 1:5000
抗原修復: 對于福爾馬林固定、石蠟包埋(FFPE)組織切片,推薦使用檸檬酸緩沖液(pH 6.0)進行熱誘導抗原修復。
產品特性說明
特異性與靈敏度
本抗體經親和純化,特異識別AMPK alpha 1蛋白的第375-425位區域,該區域位于激酶結構域與C端調控結構域之間,避免了與其他AMPK家族成員(如AMPK alpha 2)的高度同源區段的交叉反應。由于為多克隆抗體,可識別目標抗原上的多個表位,具有較高的檢測靈敏度,適用于檢測低表達水平的AMPK alpha 1。經驗證,抗體對人源和小鼠源AMPK alpha 1均有良好的反應性,可用于跨物種實驗。
工作濃度與經濟性
WB推薦稀釋范圍高達1:10,000-1:25,000,屬于高稀釋度抗體,單次實驗每毫升抗體可檢測大量膜條,顯著降低單樣本檢測成本。IHC推薦稀釋范圍為1:1000-1:5000,可根據組織類型和固定條件靈活調整。IP推薦用量明確為6 µg/mg裂解液,便于用戶計算所需抗體量,避免浪費。
儲存穩定性
在2-8°C條件下可穩定保存1年(自收貨之日起)。緩沖液中含0.09%疊d化鈉作為防腐劑,注意疊氮化物會抑制過氧化物酶活性,若計劃進行HRP偶聯二抗檢測,需在實驗前通過透析或脫鹽柱去除。
別名: 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-1; ACACA kinase; acetyl-CoA carboxylase kinase; AMPK alpha 1; AMPK subunit alpha-1; AMPKa1; HMGCR kinase; tau-protein kinase PRKAA1
核心功能:
能量代謝調控:AMPK是細胞內能量狀態的中央感受器。當ATP水平下降、AMP/ATP比值升高時(如饑餓、運動、缺氧等代謝應激),AMPK被上游激酶(如LKB1、CaMKK2)磷酸化激活。激活的AMPK磷酸化下游靶蛋白,關閉合成代謝通路(如脂肪酸合成、膽固醇合成、蛋白質合成),同時開啟分解代謝通路(如脂肪酸氧化、糖酵解、自噬),以恢復ATP水平。
脂肪酸與膽固醇合成調控:AMPK alpha 1直接磷酸化并失活乙酰輔酶A羧化酶(ACC)和羥甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMGCR),從而抑制脂肪酸和膽固醇的生物合成。這一機制使其成為代謝綜合征、非酒精性脂肪肝、高脂血癥的藥物靶點。
細胞生長與自噬:通過磷酸化TSC2和Raptor抑制mTORC1通路,抑制蛋白質合成并誘導自噬。
葡萄糖穩態:增強胰島素敏感性,促進葡萄糖攝?。ㄈ缤ㄟ^促進GLUT4轉位)。
組織分布與病理意義:
AMPK alpha 1在全身廣泛表達,而alpha 2主要在骨骼肌和心臟中高表達。PRKAA1基因多態性與2型糖尿病、肥胖、高血壓等代謝性疾病風險相關。AMPK活性下降是胰島素抵抗和衰老的標志之一。此外,AMPK在多種癌癥中表現出雙向作用:在早期抑制腫瘤生長(通過抑制mTOR誘導細胞周期停滯),但在代謝應激下可幫助腫瘤細胞適應低營養環境,因此成為癌癥治療的熱點靶點。
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