本抗體為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源多克隆抗體（貨號：A300-613A），特異性識別小鼠c-Maf轉錄因子的第150–200位氨基酸區域。經抗原親和純化，提供完整IgG分子形式，未偶聯任何標記物（Unconjugated），濃度為1000 µg/mL（1 mg/mL）。適用于Western blot（WB）檢測，反應種屬為小鼠。

產品規格與理化參數

參數項目 詳細規格

目標抗原 c-Maf（v-maf肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物）

反應種屬 小鼠

宿主來源 兔

克隆類型 多克隆

抗體形式 完整IgG

免疫原 第150–200位氨基酸之間的區域

亞型 IgG

偶聯物 無

純度 抗原親和純化

抗原物種 小鼠

濃度 1000 µg/mL（1 mg/mL）

保存條件 2–8 °C

有效期限 自收貨起1年

緩沖體系 Tris-枸櫞酸-磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

濃度測定依據：采用比爾定律（Beer’s Law），標準為1 mg/mL IgG在280 nm波長處的吸光值（A280）為1.4。

抗原背景：c-Maf轉錄因子的結構與功能

c-Maf是Maf轉錄因子家族的成員之一，該家族蛋白均含有一個高度保守的堿性區域和亮氨酸拉鏈結構域（bZIP），介導DNA結合和蛋白-蛋白相互作用。c-Maf在組織特異性基因調控和細胞分化中發揮重要作用。

核心功能：

免疫調節：在T細胞中，c-Maf是白細胞介素-4（IL-4）和白細胞介素-10（IL-10）的轉錄激活因子，參與Th2細胞分化

發育調控：參與晶狀體纖維細胞分化，對眼晶狀體的正常發育至關重要

癌基因潛能：c-Maf易位已在人多發性骨髓瘤中被發現，可能具有致癌活性

結構特征：

N端轉錄激活域（含本抗體識別的150–200區段）

C端bZIP域（堿性區+亮氨酸拉鏈），介導二聚化及與DNA的MARE位點結合

本抗體的靶向優勢：識別第150–200位氨基酸區域，位于激活域中段，可檢測內源性全長c-Maf蛋白（分子量約45–50 kDa，不同剪接變體略有差異），且能區分c-Maf與其他Maf家族成員。

別名：c-Maf、c-Maf長形式、原癌基因c-Maf、2810401A20Rik、A230108G15Rik、AW047063等。

適用范圍與推薦使用條件

> 重要說明：本抗體經測試僅確認用于Western blot（WB）應用。其他應用（如IP、IHC、ICC）尚未由生產實驗室驗證，但可能有效，用戶需自行優化。

應用技術 推薦使用條件 備注

蛋白質印跡（WB） 1:1,000 – 1:10,000 推薦起始稀釋度1:2,000–1:5,000

注：本品僅保證小鼠樣本的反應性。對于其他種屬（如人、大鼠），建議進行預實驗驗證。

標準WB流程（細胞裂解液或組織勻漿）

樣本制備：

使用含蛋白酶抑制劑（PMSF、亮肽素、抑肽酶）的RIPA或NP-40裂解液提取總蛋白

c-Maf為核轉錄因子，建議使用核蛋白提取試劑盒或高鹽裂解液（如含0.4 M NaCl的緩沖液）富集核組分，以提高檢測靈敏度

蛋白濃度定量后，加入SDS上樣緩沖液（含DTT或β-巰基乙醇），95°C煮沸5–10分鐘

凝膠電泳：

c-Maf分子量約45–50 kDa（小鼠c-Maf長形式約48 kDa）

推薦使用10% SDS-PAGE分離膠，可清晰分離c-Maf條帶

上樣量：細胞裂解液建議30–50 µg總蛋白/泳道；核蛋白提取物建議10–20 µg/泳道

轉膜：

PVDF膜（需甲醇活化）或硝酸纖維素膜

濕轉條件：恒流250–300 mA，90–120分鐘（冰浴）；或半干轉條件：15–20 V，30–45分鐘

轉膜后可用麗春紅染色確認轉膜效率和蛋白上樣量

封閉（生產實驗室參數）：

封閉液：5% 脫脂牛奶-TBST（TBS含0.05–0.1% Tween-20）

封閉條件：室溫搖床孵育1小時

一抗孵育（生產實驗室參數）：

稀釋液：5% 脫脂牛奶-TBST（與封閉液一致）

稀釋度：1:1,000 – 1:10,000（推薦起始1:2,000–1:5,000）

孵育條件：4°C過夜（或室溫搖床2小時）

注意：過夜孵育可顯著增強低豐度c-Maf的檢測信號

洗滌：

TBST洗滌3次，每次10分鐘

二抗孵育：

二抗：山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）HRP偶聯抗體，貨號 A120-101P（或其他等效產品）

稀釋度：按廠商推薦（通常1:5,000–1:20,000），使用5%牛奶-TBST稀釋

孵育條件：室溫搖床1小時

洗滌：TBST洗滌3–5次，每次10分鐘

檢測：

化學發光法（ECL），使用X光膠片或化學發光成像儀顯影

c-Maf表達水平在多數細胞系中較低，可能需要延長曝光時間（1–10分鐘）

陽性對照與樣本選擇

推薦的陽性對照樣本：

小鼠脾臟組織裂解液：T細胞中c-Maf表達較高，脾臟富含T細胞

小鼠Th2細胞：在體外分化的小鼠Th2細胞中，c-Maf被強烈誘導表達

小鼠晶狀體組織：晶狀體纖維細胞高表達c-Maf

某些小鼠骨髓瘤細胞系：如NS-1、P3X63Ag8等可能表達c-Maf（需驗證）

推薦的刺激條件：

初始CD4+ T細胞在抗CD3/CD28刺激下，加入IL-4可誘導c-Maf表達（24–48小時）

陰性對照：

使用兔同型對照IgG替代一抗

使用已知不表達c-Maf的細胞系（如未活化的初始CD4+ T細胞）

儲存與穩定性

儲存條件：

溫度：2–8°C（嚴禁冷凍，冷凍會導致抗體蛋白變性及活性喪失）

防腐劑：0.09%疊d化鈉，有效抑制細菌生長

分裝建議：本品濃度為1 mg/mL，體積適中。如需避免反復取用污染，可無菌分裝為10–20 µL/管，仍儲存于2–8°C（不建議-20°C）

有效期：自收貨之日起12個月。超過有效期后使用，建議重新驗證效價（如通過WB檢測陽性對照樣本）。