產品概述

本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源多克隆抗體（貨號：A302-869A），特異性靶向人源RNF2蛋白（Ring Finger Protein 2，又稱RING1B、BAP-1）。該抗體經抗原親和純化，以完整IgG形式提供，適用于染色質免疫沉淀測序（ChIP-Seq）、免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質印跡（WB）實驗，可識別人源RNF2蛋白。本品濃度為1000 µg/ml，為表觀遺傳學和泛素化研究提供了高靈敏度的檢測工具。

靶點背景：RNF2的多聚梳家族功能與E3泛素連接酶活性

RNF2（Ring finger protein 2）是多聚梳家族（Polycomb group, PcG）的核心蛋白成員，在轉錄抑制、染色質修飾和早期發育中發揮關鍵作用。

結構與功能特征：

含有一個特征性的RING finger結構域，賦予E3泛素連接酶活性

作為PRC1復合物（Polycomb repressive complex 1）的核心組分，催化組蛋白H2A第119位賴氨酸（H2AK119ub）的單泛素化修飾

通過與泛素結合酶HIP2（huntingtin interacting protein 2）相互作用，介導底物蛋白的泛素化降解

生物學功能：

與轉錄因子CP2（TFCP2/CP2）相互作用并抑制其活性

參與小鼠前后軸的特化以及早期發育中的細胞增殖調控

維持基因沉默狀態，在干細胞分化、X染色體失活和癌癥發生中發揮作用

別名： BAP-1、DING、HIPI3、RING1B、RING2、huntingtin-interacting protein 2-interacting protein 3、protein DinG等

抗體特性規格

參數 規格

靶點 RNF2 (RING1B)

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

同種型 IgG

偶聯物 非偶聯

純度 抗原親和純化

濃度 1000 µg/ml（1 mg/ml）

抗原物種 人

反應性 人（經驗證）

儲存與穩定性

儲存溫度：2-8°C（請勿冷凍）

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液：Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮鈉

> 注意：本品濃度高達1000 µg/ml，使用前可根據實驗需要稀釋至工作濃度。疊氮鈉作為防腐劑，進行ChIP-Seq或HRP檢測時需注意去除。

應用方法與實驗條件

蛋白質印跡（WB）

推薦稀釋度：1:2000 - 1:10,000

通用流程要點：

封閉液及抗體稀釋液：5% Milk-TBST

一抗孵育：過夜（4°C）

二抗選擇：

細胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（A120-101P）

免疫沉淀物WB：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，封閉液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020），以避免IgG重鏈信號干擾（約55 kDa）

預期條帶：RNF2分子量約為38-42 kDa（實際遷移可能因修飾略有差異）。

免疫沉淀（IP）

使用劑量：6 µg抗體/mg細胞裂解液

免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋度：1:500 - 1:2000

抗原修復：對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導抗原修復。

染色質免疫沉淀測序（ChIP-Seq）

使用劑量：10 µg抗體/實驗（參考Ram O et al., Cell. 2011 Dec 23;147(7):1628-39）

操作建議：

按照已發表的ChIP-Seq流程進行染色質片段化（超聲或酶切）

使用10 µg抗體與染色質孵育過夜

推薦設置陰性對照（正常兔IgG）和陽性對照（如H3K27me3抗體）

洗脫后的DNA進行建庫和測序

> 注：該抗體已成功應用于ChIP-Seq實驗，文獻中提供了標準化的實驗參數。

應用注意事項

1. 超高濃度母液（1000 µg/ml）：本抗體提供濃度顯著高于常規產品（通常200 µg/ml）。WB使用時建議至少稀釋2000倍（終濃度0.5 µg/ml），高表達樣本可稀釋至10,000倍（0.1 µg/ml），大幅節約抗體用量。IHC從1:500開始優化，ChIP-Seq按10 µg/次使用，可根據實驗規模提前分裝。

2. ChIP-Seq專用驗證：本品已在Cell期刊發表的ChIP-Seq研究中得到應用（10 µg/反應）。這是本抗體的核心功能優勢，可直接參考文獻中的實驗條件，減少摸索時間。

3. 多平臺兼容性：經驗證可用于ChIP、IHC、IP和WB四種應用。IHC推薦稀釋范圍1:500-1:2000，建議從1:500開始預實驗，根據信號強度和背景調整。抗原修復務必使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0），若信號弱可嘗試EDTA（pH 8.0），但優先檸檬酸。

4. IP實驗優化：按6 µg/mg裂解液用量加入抗體，建議設置正常兔IgG作為陰性對照。由于RNF2是PRC1復合物核心組分，IP后可通過WB檢測其他PRC1成員（如BMI1、RING1A）驗證復合物完整性。使用Protein A/G瓊脂糖珠捕獲時，注意洗滌充分以降低非特異性背景。

5. WB稀釋范圍寬：1:2000-1:10,000。RNF2在多種細胞系（如HeLa、HEK293、MCF-7）中均有表達，建議從中高稀釋度（1:5000）開始。若檢測內源低表達水平，可降低稀釋度至1:2000。使用化學發光檢測時，曝光時間可根據信號強度調整。

6. 儲存與取用：2-8°C恒溫保存，避免反復開啟和溫度波動。本品濃度高，無需分裝，按需吸取即可。請勿冷凍，冷凍會導致抗體聚集和活性下降，尤其影響ChIP-Seq性能。

7. 疊氮鈉對HRP及ChIP-Seq的影響：

HRP檢測：疊氮鈉不可逆抑制辣根過氧化物酶活性。WB實驗中，通過充分洗滌（3次×5分鐘）可有效去除；IHC實驗中，抗原修復步驟本身可稀釋去除疊氮鈉。

ChIP-Seq：疊氮鈉可能影響染色質免疫沉淀效率，建議在抗體稀釋和孵育緩沖液中避免額外添加疊氮鈉。原緩沖液中的0.09%疊氮鈉在10 µg抗體總量中濃度極低（約0.09%×10 µl?實際抗體體積為10 µl/1000 µg? 需要計算：1000 µg/ml，10 µg為10 µl，疊氮鈉含量約9 µg，在ChIP反應體系（通常500 µl-1 ml）中被充分稀釋至0.0009%-0.0018%，通常不影響。但若擔心可透析去除。

8. ChIP-Seq實驗中的對照設置：建議同時進行Input DNA和陰性IgG對照。使用本抗體獲得的富集區域應與已知PRC1靶基因（如HOX基因簇）進行比對驗證。

相關產品推薦

山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（A120-101P）——用于細胞裂解液WB檢測

抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體——用于免疫沉淀物WB檢測，有效避免重鏈干擾

正常豬血清（S100-020）——用于IP-WB封閉液添加（5%），降低非特異性背景

蛋白A/G磁珠或瓊脂糖珠——用于ChIP和IP實驗中的抗體捕獲