產品概述

本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗DDX5（DEAD-box解旋酶5）多克隆抗體（貨號：A300-523A），經表位特異性親和純化，以未標記形式提供。DDX5（亦稱p68、RNA解旋酶p68）是DEAD-box蛋白家族的成員，在RNA代謝的多個層面（包括前體mRNA剪接、RNA合成與降解、核糖體生物發(fā)生等）發(fā)揮核心作用，并參與轉錄共激活調控。本抗體識別人和小鼠DDX5蛋白，適用于免疫組織化學、免疫沉淀及免疫印跡檢測，是RNA代謝、轉錄調控、激素信號通路及癌癥研究的實用工具。

基本規(guī)格參數

參數 具體信息

靶標 DDX5（DEAD-box解旋酶5）

反應種屬 小鼠、人

應用 IHC, IP, WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 全IgG

免疫原 位于第564位至C端之間的區(qū)域

自身抗體亞型 IgG

標記物 未標記

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人

濃度 200 µg/ml

保存溫度 2 - 8 °C

有效期 自收貨之日起1年

緩沖液 Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA和0.09%疊氮鈉

生產與純化工藝

本抗體的生產采用表位特異性親和純化策略：

1. 免疫原設計：針對人DDX5蛋白中第575位至C端（第614位）之間的區(qū)域（參考序列NP_004387.1）。該C端區(qū)域在DDX5和其同源蛋白DDX17之間存在差異，有利于特異性識別。

2. 免疫程序：使用上述合成肽段對兔進行免疫，誘導產生特異性抗血清。

3. 親和純化：將DDX5特異的C端表位肽固定于固相支持介質上，通過親和層析從抗血清中特異性分離目標抗體。該策略確保抗體僅識別目標表位，減少非特異性背景。

4. 濃度測定：依據比爾定律，1 mg/ml IgG在280 nm波長下的吸光度（A280）為1.4。本品最終濃度為200 µg/ml。

表位定位：抗體識別的表位位于人DDX5蛋白的第575-614殘基之間（C端區(qū)域）。該區(qū)域在小鼠DDX5中高度保守，因此抗體可與小鼠源DDX5發(fā)生交叉反應。

特異性驗證

反應種屬：人、小鼠

識別表位：DDX5蛋白C端區(qū)域（575-614 aa）

經免疫印跡和免疫沉淀驗證的特異性：與人及小鼠DDX5特異性結合

與DDX17的關系：DDX5與DDX17高度同源并形成異源二聚體。本抗體表位位于C端，該區(qū)域兩者相似度較低，因此抗體可能不識別DDX17或識別效率較低，但用戶仍需通過實驗驗證。

潛在交叉反應：DEAD-box家族成員眾多（如DDX3、DDX17等），保守結構域廣泛存在。由于本抗體采用C端特異表位，理論上可降低與其他家族成員的交叉反應。

生物學背景

DDX5（基因符號：DDX5，GeneID: 1655，UniProt: P17844）是DEAD-box家族RNA解旋酶的典型代表：

結構特征：DDX5包含DEAD-box蛋白的多個保守基序，其中最著名的是Asp-Glu-Ala-Asp（DEAD）氨基酸序列。該基序賦予ATP依賴的RNA解旋酶活性。

核心功能：

RNA代謝全能參與者：DDX5參與前體mRNA剪接、RNA合成、降解、核輸出、翻譯起始、RNA二級結構形成、核糖體生物發(fā)生以及核糖核蛋白復合物的組裝。

轉錄共激活：除RNA解旋酶功能外，DDX5還可作為轉錄共激活因子與多種轉錄因子/共調節(jié)因子相互作用，包括：雌激素受體α（ERα，共激活）、CBP/p300、Smad3、p53。通過這些互作，DDX5調控雌激素信號、TGF-β應答和DNA損傷應答等相關基因的表達。

與DDX17協(xié)同：DDX5與DDX17形成異源二聚體，兩者在多種細胞過程中功能互補。

臨床意義：DDX5在多種癌癥（乳腺癌、結直腸癌、肝癌、膠質瘤等）中異常表達，影響細胞增殖、侵襲和化療敏感性，是潛在的治療靶點和預后標志物。

應用與推薦稀釋比例

以下推薦稀釋比例為起始參考值。需注意，并非所有列出的應用均已在本實驗室完成具體驗證，建議用戶根據樣本類型和實驗體系進行梯度優(yōu)化。

應用 推薦稀釋比例或用量 備注

免疫組織化學 1:200 - 1:1000 FFPE組織切片推薦使用檸檬酸緩沖液pH6.0進行抗原修復

免疫沉淀 6 µg/mg 裂解物 即每毫克總蛋白使用6微克抗體

免疫印跡 1:2000 - 1:10,000 詳見下方標準操作條件

免疫印跡標準操作條件（經實驗室驗證）：

封閉液和抗體稀釋液：5% 脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜（4°C或室溫）

細胞裂解液WB的二抗：使用山羊抗兔IgG（H+L）抗體（貨號A120-101P）

免疫沉淀樣本WB的二抗：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020），以避免重鏈交叉信號干擾

免疫組織化學（IHC）典型流程（FFPE組織切片）：

1. 脫蠟和水化

2. 抗原修復：使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0），高壓或微波加熱進行抗原修復

3. 封閉內源性過氧化物酶（如適用）

4. 一抗孵育：1:200-1:1000，4°C過夜

5. 二抗及顯色

DDX5主要定位于細胞核（核漿和核仁），在IHC中應呈現核染色模式。

免疫沉淀（IP）指南：

每毫克細胞裂解物總蛋白使用6 µg抗體（本品濃度為200 µg/ml，即每毫克裂解物需使用30 µl抗體）

建議使用蛋白A/G瓊脂糖珠（兔源抗體推薦蛋白A）

裂解緩沖液推薦使用非變性裂解液（如含1% NP-40的RIPA緩沖液，不含SDS或SDS<0.1%）

設正常兔IgG作為同型對照

陽性對照建議：

人源細胞系（如HeLa、HEK293T、MCF-7）或小鼠細胞系（如NIH/3T3）的全細胞裂解物

DDX5在大多數細胞系中廣泛表達，可選用

陰性對照建議：

使用正常兔IgG替代一抗

使用DDX5敲低（siRNA）或敲除細胞裂解物（如CRISPR DDX5敲除細胞系）

使用與保存注意事項

保存條件：請于2-8°C條件下保存，切勿冷凍。反復凍融會導致抗體變性失效。在指定條件下，自收貨之日起1年內穩(wěn)定有效。

緩沖液成分：本抗體溶于Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA（穩(wěn)定劑）和0.09%疊氮鈉（防腐劑）。BSA的存在有助于防止抗體在低濃度下吸附于管壁，但如需進行無蛋白的標記反應（如生物素標記），建議先通過透析去除BSA和疊氮鈉。

稀釋緩沖液建議：

WB：使用5%牛奶-TBST

IHC：使用含1% BSA或正常血清的PBS

IP：使用裂解緩沖液本身稀釋抗體

分子量信息：人DDX5蛋白的理論分子量約為69 kDa（UniProt P17844）。在還原性SDS-PAGE中，可觀察到約68-70 kDa的條帶（有時稱為p68）。若在預測分子量以外位置觀察到額外條帶，可能為降解產物或翻譯后修飾。