一、產品概述

本產品由艾美捷Bethyl Laboratories推出，是一款針對人TFEB蛋白的高親和力兔多克隆抗體（貨號 A303-673A），經抗原親和純化制備。該抗體適用于免疫沉淀（IP）及蛋白質印跡（WB）檢測，可同時識別人和小鼠來源的靶蛋白，僅供研究使用。

TFEB（Transcription factor EB）是MiT/TFE家族成員之一，屬于堿性螺旋-環-螺旋亮氨酸拉鏈（bHLH-Zip）轉錄因子。TFEB能夠特異性識別E-box序列（3′-CANNTG-5′），與自身或家族其他成員（如TFE3、MITF）形成二聚體后高效結合DNA。TFEB在細胞中發揮雙重核心功能：一方面與TFE3協同激活T細胞中CD40L的表達，參與CD4+ T細胞依賴的抗體應答及胸腺依賴性體液免疫；另一方面，TFEB通過識別溶酶體相關基因調控區的CLEAR-box序列（5′-GTCACGTGAC-3′），激活溶酶體基因的表達，是溶酶體生物發生和自噬通路的關鍵調控因子。此外，TFEB還可識別免疫球蛋白重鏈增強子中的γ-E3 box。近年來，TFEB已成為溶酶體穩態、自噬、代謝疾病及神經退行性疾病研究的熱點靶點。

二、產品規格

參數 詳細信息

靶標 TFEB

反應種屬 小鼠， 人

應用 IP， WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

免疫原 位于第426位至C末端之間

同種型 IgG

偶聯物 未偶聯

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人

濃度 1000 µg/mL（1 mg/mL）

緩沖液 Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

儲存條件 2–8°C

有效期 自收貨之日起1年

三、靶標詳細信息

3.1 別名

ALPHATFEB， BHLHE35， class E basic helix-loop-helix protein 35， T-cell transcription factor EB， TCFEB。

3.2 功能背景

TFEB是調控細胞清除通路的核心轉錄因子，其功能涵蓋以下方面：

溶酶體生物發生：TFEB識別CLEAR-box（協同溶酶體表達與調控元件），激活超過200個溶酶體相關基因的表達，包括組織蛋白酶、溶酶體膜蛋白等。

自噬調控：TFEB誘導自噬體形成及自噬溶酶體融合所需的基因（如LC3、p62、ATG家族），是細胞應對營養匱乏和應激的關鍵調節因子。

免疫調節：在活化的CD4+ T細胞中，TFEB與TFE3共同激活CD40L轉錄，促進B細胞類別轉換和生發中心形成，介導胸腺依賴性體液免疫應答。

代謝與疾病：TFEB活性受mTORC1磷酸化調控（位于Ser142/Ser211位點）。在溶酶體貯積癥、帕金森病、阿爾茨海默病及非酒精性脂肪肝中，TFEB的核轉位和轉錄活性異常，成為潛在治療靶點。

四、抗體制備與純化

4.1 免疫原及表位定位

本抗體采用的免疫原對應人TFEB蛋白序列中第426位至C末端之間的區域。經精確定位，A303-673A所識別的表位位于第426–476氨基酸區間（參考序列NP_009093.1）。該區域位于C端轉錄激活域（TAD）內，遠離bHLH二聚化和DNA結合域，因此抗體不太可能干擾TFEB與DNA或二聚化伴侶的結合，適合IP及后續功能研究。

4.2 純化方法

抗體通過抗原親和層析純化。將針對TFEB C端表位（第426–476位）的特異性多肽固定于固相載體，使抗血清中的特異性IgG結合于該表位，經洗脫獲得高純度抗體。此法確保最終產品中只保留識別目標表位的抗體分子，顯著降低非特異性背景，尤其適合IP-WB聯用實驗。

4.3 濃度測定

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定，以1 mg/mL IgG在280 nm下的吸光度（A280）為1.4作為標準。實測濃度為1000 µg/mL（1 mg/mL）。

4.4 緩沖液與防腐劑

抗體儲存于Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液（pH 7–8），含0.09%疊d化鈉作為防腐劑。注意：疊d化鈉有毒，操作時請佩戴防護手套。若用于細胞培養或體內實驗，使用前應通過透析或超濾去除。

五、儲存與穩定性

收到產品后，請將抗體置于2–8°C條件下儲存。切勿冷凍，反復凍融會導致抗體變性聚集、效價下降。在推薦的儲存條件下，自收貨之日起1年內可保持穩定。若需長期保存，可分裝后凍存于-20°C或-80°C，分裝時避免稀釋，每份建議一次用完，避免反復凍融。

六、產品特點總結

1. 雙種屬反應性：同時識別人和小鼠TFEB，適用于跨物種研究。

2. C端表位精確定位：抗原親和純化基于第426–476位氨基酸，位于轉錄激活域，不影響二聚化及DNA結合，適合IP及蛋白互作研究。

3. 高濃度（1 mg/mL）與寬稀釋范圍：WB稀釋比1:2000–1:25,000，6 µg/mg裂解液即可高效IP，節約抗體用量。

4. 低背景IP-WB優化：推薦使用輕鏈HRP二抗+5%正常豬血清體系，消除免疫球蛋白重/輕鏈對目標條帶的干擾（TFEB約55-65 kDa，輕鏈25 kDa和重鏈55 kDa可能干擾）。尤其重鏈55 kDa與TFEB接近，必須使用輕鏈特異性二抗。

5. 長期穩定性：2–8°C儲存1年有效，簡化冷鏈管理。

注意：本產品僅限研究使用，不得用于診斷或治療。用戶應自行驗證抗體在其特定實驗體系中的適用性。以上信息覆蓋了A303-673A抗體的全部規格、應用參數及背景知識，使用者可據此快速建立TFEB的WB和IP檢測方案，獲得可靠且可重復的結果。